| 缩略词 | 第1-8页 |
| 中英文摘要 | 第8-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-24页 |
| 1 柑桔溃疡病的发生与危害 | 第13-14页 |
| ·病害的危害与分布 | 第13页 |
| ·病害的发生条件与传播 | 第13页 |
| ·病原菌的存活期 | 第13-14页 |
| 2 柑桔溃疡病菌的菌系与分类研究 | 第14-15页 |
| 3 柑桔溃疡病菌的基因组研究 | 第15-16页 |
| 4 柑桔溃疡病菌的检疫检测方法和技术 | 第16-19页 |
| ·常规检验法 | 第16页 |
| ·噬菌体检验法 | 第16页 |
| ·酶联免疫吸附法(ELISA)及斑点免疫结合法(Dot-ELISA或DIA) | 第16-17页 |
| ·免疫荧光与免疫放射分析法 | 第17页 |
| ·脂肪酸甲脂与氨肽酶分析法 | 第17页 |
| ·气味及激光检测法 | 第17-18页 |
| ·DNA杂交技术 | 第18页 |
| ·DNA指纹图谱分析 | 第18页 |
| ·PCR检测技术 | 第18-19页 |
| 5 核酸分子检测与诊断技术 | 第19-20页 |
| ·核酸分子杂交 | 第19页 |
| ·分子遗传标记 | 第19-20页 |
| ·连接酶链式反应(LCR) | 第20页 |
| 6 PCR技术及其在植物病原物检测中的应用 | 第20-24页 |
| ·PCR技术原理及特点 | 第20-21页 |
| ·PCR技术用于病原物检测的策略 | 第21-22页 |
| ·特殊PCR技术 | 第22-24页 |
| 第二章 引言 | 第24-26页 |
| 第三章 柑桔溃疡病菌PCR检测技术体系的建立 | 第26-44页 |
| 1 材料和方法 | 第26-33页 |
| ·试验材枓 | 第26-28页 |
| ·供试菌株及培养条件 | 第26页 |
| ·主要化学试剂 | 第26-27页 |
| ·主要试验仪器 | 第27页 |
| ·培养基 | 第27-28页 |
| ·常用储备液及缓冲液 | 第28页 |
| ·试验方法 | 第28-33页 |
| ·供试菌株DNA快速制备 | 第28-29页 |
| ·DNA浓度的测定 | 第29页 |
| ·柑桔溃疡病菌特异性引物的设计与筛选 | 第29页 |
| ·PCR扩增条件的优化 | 第29-30页 |
| ·PCR检测性能测定 | 第30-31页 |
| ·检测的特异性 | 第30-31页 |
| ·检测的灵敏度 | 第31页 |
| ·不同热循环仪及温度控制方式检测比较 | 第31页 |
| ·PCR扩增结果分析 | 第31页 |
| ·扩增靶DNA片断的克隆与测序 | 第31-33页 |
| ·无害化参照体系的构建 | 第33页 |
| 2 结果与分析 | 第33-40页 |
| ·扩增的靶片断在核苷酸序列数据库中相似性比对结果 | 第33-35页 |
| ·PCR扩增条件和反应程序 | 第35-36页 |
| ·PCR检测的性能 | 第36-38页 |
| ·扩增靶DNA片断的克隆与测序结果 | 第38-39页 |
| ·无害化参照体系 | 第39-40页 |
| 3 讨论 | 第40-44页 |
| ·各对引物的检测性能比较 | 第40页 |
| ·PCR扩增正确性的验证和不同测序方法比较 | 第40-41页 |
| ·无害化参照体系的构建与意义 | 第41-42页 |
| ·热循环仪及温度控制方式对PCR扩增的影响 | 第42页 |
| ·经典PCR的应用前景及与荧光定量PCR的比较 | 第42-44页 |
| 第四章 制样技术和检测试剂盒的研制与应用 | 第44-55页 |
| 1 材料和方法 | 第44-46页 |
| ·试验材料 | 第44页 |
| ·供试菌株与田间柑桔样品 | 第44页 |
| ·主要化学试剂及溶液 | 第44页 |
| ·主要试验仪器 | 第44页 |
| ·试验方法 | 第44-46页 |
| ·样品浸泡液及浸泡时间优化 | 第44-45页 |
| ·化学增强剂的增效比较及浓度优化 | 第45页 |
| ·实测中柑桔组织内外抑制物质的去除 | 第45页 |
| ·无症带菌柑桔样品的处理 | 第45页 |
| ·实测中模板量对PCR扩增的影响 | 第45页 |
| ·试剂盒的研制 | 第45-46页 |
| ·生物活性分子稳定剂(MS)的加入效果及用量 | 第45-46页 |
| ·试剂盒的贮存处理方式及保存期测定 | 第46页 |
| ·实际检测与应用 | 第46页 |
| 2 结果与分析 | 第46-52页 |
| ·样品浸泡液及浸泡时间 | 第46页 |
| ·化学增强剂及其浓度 | 第46-48页 |
| ·实测中柑桔组织内外抑制物质的去除 | 第48页 |
| ·无症带菌柑桔样品的处理 | 第48-50页 |
| ·实测中的模板量对PCR扩增的影响 | 第50页 |
| ·试剂盒的研制 | 第50-51页 |
| ·生物活性分子稳定剂(MS)的加入效果及用量 | 第50-51页 |
| ·试剂盒的贮存处理方式及保存期 | 第51页 |
| ·实际检测与应用 | 第51-52页 |
| 3 讨论 | 第52-55页 |
| ·植物组织内外抑制物质的去除 | 第52页 |
| ·柑桔样品取样方法及制备技术对检测准确性的影响 | 第52-53页 |
| ·浸泡制样技术在农业植物有害生物检测中的应用 | 第53-54页 |
| ·检测假阳性与假阴性的排除与降低 | 第54-55页 |
| 第五章 结论与展望 | 第55-57页 |
| 1 结论 | 第55页 |
| 2 展望 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 附录A 发表论文与参加课题情况 | 第65页 |
| 附录B 测序结果 | 第65-67页 |