| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 引言 | 第13-15页 |
| 1 植物适应低磷胁迫的机制及相关基因工程研究进展 | 第15-32页 |
| ·土壤中磷素营养状况 | 第15-16页 |
| ·磷在土壤中的循环、转化及有效性 | 第16-19页 |
| ·磷在土壤—植物生态系统中的循环 | 第16-17页 |
| ·磷在土壤中的转化及有效性 | 第17-19页 |
| ·缺磷对植物的影响 | 第19-21页 |
| ·磷营养与植物生长发育 | 第19页 |
| ·磷营养与植物光合作用 | 第19-20页 |
| ·磷营养与植物的产量和品质 | 第20-21页 |
| ·植物适应低磷胁迫的生理学机制 | 第21-25页 |
| ·根系形态和空间构型 | 第21-22页 |
| ·根冠间的互作 | 第22页 |
| ·根系分泌物 | 第22-25页 |
| ·土壤微生物 | 第25页 |
| ·根系分泌物中有机酸的分泌及活化土壤难溶磷的机制 | 第25-27页 |
| ·根系有机酸的分泌机制 | 第25-26页 |
| ·根系有机酸活化土壤难溶磷的机制 | 第26-27页 |
| ·有机酸代谢途径基因的基因工程研究进展 | 第27-30页 |
| ·柠檬酸合酶基因cit的基本原理 | 第28页 |
| ·柠檬酸合酶基因cit的研究现状 | 第28-29页 |
| ·苹果酸脱氢酶基因mdh的基因工程原理 | 第29页 |
| ·苹果酸脱氢酶基因的研究现状 | 第29-30页 |
| ·本论文研究目的及意义 | 第30-32页 |
| 2 Po-mMDH和Po-mCit基因的克隆及序列分析 | 第32-50页 |
| ·材料与试剂 | 第32-33页 |
| ·实验材料 | 第32页 |
| ·菌种与质粒 | 第32页 |
| ·主要药品 | 第32页 |
| ·培养基 | 第32页 |
| ·主要配制试剂 | 第32-33页 |
| ·实验方法 | 第33-39页 |
| ·草酸青霉菌总RNA的提取 | 第33页 |
| ·Po-mMDH和Po-mCit编码区部分片段的克隆 | 第33-37页 |
| ·Po-mMDH和Po-mCit cDNA的5’端序列克隆 | 第37页 |
| ·Po-mMDH和Po-mCit cDNA的3’端序列克隆 | 第37页 |
| ·Po-mMDH和Po-mCit基因cDNA全长序列克隆 | 第37-38页 |
| ·Po-mMDH和Po-mCit基因编码蛋白的分析 | 第38-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-48页 |
| ·Po-mMDH和Po-mCit基因cDNA全序列的克隆 | 第39-41页 |
| ·Po-mMDH基因序列及同源性分析 | 第41-44页 |
| ·Po-mCit基因序列及同源性分析 | 第44-48页 |
| ·讨论 | 第48-49页 |
| ·小结 | 第49-50页 |
| 3 Po-mMDH和Po-mCit基因在大肠杆菌中的表达 | 第50-68页 |
| ·材料与试剂 | 第50-51页 |
| ·菌种与质粒 | 第50页 |
| ·酶和化学试剂 | 第50页 |
| ·培养基 | 第50页 |
| ·主要配置试剂 | 第50-51页 |
| ·实验方法 | 第51-56页 |
| ·Po-mMDH和Po-mCit基因原核表达载体的构建 | 第51-54页 |
| ·Po-mMDH和Po-mCit基因的表达与纯化 | 第54页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第54页 |
| ·SDS-PAGE | 第54-55页 |
| ·酶活性测定 | 第55-56页 |
| ·磷溶解能力测定 | 第56页 |
| ·上清液含磷量和有机酸含量检测 | 第56页 |
| ·结果与分析 | 第56-65页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第56-59页 |
| ·重组Po-mMDH和Po-mCit的分离纯化 | 第59-60页 |
| ·Po-mMDH基因在大肠杆菌中的表达 | 第60-63页 |
| ·Po-mCit基因在大肠杆菌中的表达 | 第63-65页 |
| ·讨论 | 第65-67页 |
| ·小结 | 第67-68页 |
| 4 Po-mMDH基因植物表达载体构建及烟草表达 | 第68-88页 |
| ·材料与试剂 | 第68-69页 |
| ·实验材料 | 第68页 |
| ·菌种与质粒 | 第68页 |
| ·主要药品 | 第68页 |
| ·培养基 | 第68-69页 |
| ·主要配制试剂 | 第69页 |
| ·实验方法 | 第69-77页 |
| ·Po-mMDH基因植物表达载体的构建 | 第69-73页 |
| ·Po-mMDH基因转化烟草 | 第73-74页 |
| ·转化植株的分子检测 | 第74-76页 |
| ·转基因烟草根部MDH活性分析 | 第76-77页 |
| ·转基因烟草根部malate含量和根分泌malate量 | 第77页 |
| ·转基因烟草在低可利用磷介质中的生长状况 | 第77页 |
| ·结果与分析 | 第77-86页 |
| ·Po-mMDH基因植物表达载体的构建 | 第77-80页 |
| ·Po-mMDH基因的烟草转化及分子检测 | 第80-82页 |
| ·转基因烟草根系的MDH活性分析 | 第82-83页 |
| ·转基因烟草根系和根分泌的苹果酸含量 | 第83-84页 |
| ·转基因烟草对难溶性无机磷的利用 | 第84-86页 |
| ·讨论 | 第86-87页 |
| ·小结 | 第87-88页 |
| 5 Po-mCit基因植物表达载体构建及烟草表达 | 第88-104页 |
| ·材料与试剂 | 第88页 |
| ·实验材料 | 第88页 |
| ·菌种与质粒 | 第88页 |
| ·主要药品 | 第88页 |
| ·培养基 | 第88页 |
| ·主要配制试剂 | 第88页 |
| ·实验方法 | 第88-93页 |
| ·Po-mCit基因植物表达载体的构建 | 第88-91页 |
| ·Po-mCit基因转化烟草 | 第91-92页 |
| ·转化植株的分子检测 | 第92-93页 |
| ·转基因烟草根部Cit活性分析 | 第93页 |
| ·转基因烟草根部citrate含量和根分泌citrate量 | 第93页 |
| ·不同磷条件下转基因烟草的生长状况 | 第93页 |
| ·结果及分析 | 第93-102页 |
| ·Po-mCit基因植物表达载体的构建 | 第93-97页 |
| ·Po-mCit基因的烟草转化及分子检测 | 第97-99页 |
| ·不同磷条件下转基因烟草柠檬酸合酶活性分析 | 第99-100页 |
| ·不同磷条件下转基因烟草根中和根分泌的柠檬酸含量 | 第100-101页 |
| ·不同磷条件下转基因烟草的生长和磷营养状况 | 第101-102页 |
| ·讨论 | 第102-103页 |
| ·小结 | 第103-104页 |
| 结论与展望 | 第104-107页 |
| 结论 | 第104-105页 |
| 创新点摘要 | 第105页 |
| 有待进一步开展的工作 | 第105-106页 |
| 展望 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-117页 |
| 附录 | 第117-127页 |
| 攻读博士学位期间发表学术论文情况 | 第127-128页 |
| 致谢 | 第128-129页 |
| 作者简介 | 第129-130页 |
