| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-14页 |
| 引言 | 第14-15页 |
| 1 文献综述 | 第15-45页 |
| ·转基因植物安全性问题 | 第15-23页 |
| ·转基因植物的发展现状 | 第15-16页 |
| ·转基因植物的安全性争论 | 第16页 |
| ·转基因植物安全性的根源 | 第16-18页 |
| ·转基因植物安全性问题的解决之道 | 第18-22页 |
| ·获得无载体骨架、无选择标记转基因植株的策略 | 第22-23页 |
| ·转基因技术研究现状 | 第23-27页 |
| ·植物遗传转化概述 | 第23-24页 |
| ·农杆菌介导的传统遗传转化 | 第24-26页 |
| ·农杆菌介导的原位转化研究 | 第26-27页 |
| ·转基因大豆研究现状 | 第27-34页 |
| ·农杆菌介导法 | 第28-30页 |
| ·基因枪法 | 第30页 |
| ·显微注射法 | 第30-31页 |
| ·花粉管通道法 | 第31-34页 |
| ·烯与ACC合酶 | 第34-43页 |
| ·烯的生理学效应 | 第34-35页 |
| ·乙烯的生物合成与ACC合酶结构、性质 | 第35-37页 |
| ·ACC合酶表达调控 | 第37-42页 |
| ·天然反义转录物发现的意义与反义RNA技术 | 第42页 |
| ·ACC合酶反义基因转化研究 | 第42-43页 |
| ·本研究的目的、意义和主要内容 | 第43-45页 |
| ·花粉管通道法的深入研究 | 第43页 |
| ·大豆乙烯释放调控研究的意义 | 第43-45页 |
| 2 花粉管通道法转化路径关键因素鉴定 | 第45-61页 |
| ·实验材料 | 第45-47页 |
| ·大豆材料 | 第45页 |
| ·菌种、质粒 | 第45页 |
| ·实验仪器 | 第45-46页 |
| ·药品与试剂 | 第46-47页 |
| ·实验方法 | 第47-52页 |
| ·菌种保存、菌体培养及质粒DNA的制备 | 第47-48页 |
| ·大豆花粉管通道法两种转化路径比较实验 | 第48页 |
| ·转化大豆叶片总DNA提取 | 第48-49页 |
| ·转化大PCR分析 | 第49-50页 |
| ·转化率统计学分析 | 第50页 |
| ·转化大豆植株叶片总RNA提取 | 第50页 |
| ·转化大豆RT-PCR分析 | 第50-51页 |
| ·转化大豆植株叶片GUS组织化学染色 | 第51页 |
| ·转化大豆Southern杂交分析 | 第51-52页 |
| ·转基因后代材料的遗传学分析 | 第52页 |
| ·实验结果 | 第52-59页 |
| ·用于转化的质粒载体 | 第52-53页 |
| ·两种转化处理豆荚的形态效应 | 第53-54页 |
| ·两种转化处理的转化效应调查 | 第54-55页 |
| ·转化大PCR分析 | 第55-56页 |
| ·gus报告基因转录水平表达分析 | 第56-57页 |
| ·gus报告基因组织化学分析 | 第57页 |
| ·gus报告基因转基因整合分析 | 第57-58页 |
| ·转基因后代材料的遗传学分析 | 第58-59页 |
| ·讨论 | 第59-60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 3 大豆子房原位转化法的建立 | 第61-73页 |
| ·实验材料 | 第61页 |
| ·植物材料 | 第61页 |
| ·菌种、质粒 | 第61页 |
| ·实验仪器、药品与试剂 | 第61页 |
| ·实验方法 | 第61-65页 |
| ·gus报告基因最小化线性转化元件的制备 | 第61-62页 |
| ·gus报告基因最小化线性转化元件的烟草叶片瞬时表达系统验证 | 第62-63页 |
| ·gus报告基因最小化线性转化元件四种转化路径比较实验 | 第63页 |
| ·最佳转化路径扩大品种转化实验 | 第63页 |
| ·转化率统计学分析 | 第63页 |
| ·转化大豆及后代植株总DNA提取与PCR检测 | 第63-64页 |
| ·转化大豆斑点杂交分析 | 第64页 |
| ·转化大豆PCR-Southern | 第64页 |
| ·转化大豆与后代植株Southern杂交 | 第64-65页 |
| ·转化大豆阳性后代叶片总RNA的提取 | 第65页 |
| ·转化大豆阳性后代RT-PCR分析 | 第65页 |
| ·转化大豆阳性后代GUS staining分析 | 第65页 |
| ·实验结果 | 第65-71页 |
| ·gus最小化线性转化元件 | 第65页 |
| ·gus最小化线性转化元件的瞬时表达结果 | 第65-66页 |
| ·不同长度转化路径的转化效应 | 第66-67页 |
| ·不同品种大豆基因型对转化率的影响 | 第67页 |
| ·转化大豆PCR检测 | 第67-68页 |
| ·转化材料点杂交分析 | 第68-69页 |
| ·转化大豆 PCR-Southern杂交检测 | 第69页 |
| ·转化大豆及阳性后代植株Southern blot检测 | 第69-70页 |
| ·转基因后代的遗传学分析 | 第70-71页 |
| ·转基因材料的RT-PCR检测 | 第71页 |
| ·转基因材料GUS检测 | 第71页 |
| ·讨论 | 第71-72页 |
| ·小结 | 第72-73页 |
| 4 大豆ACC合酶相关基因克隆 | 第73-83页 |
| ·大豆材料 | 第73页 |
| ·实验方法 | 第73-75页 |
| ·大豆伤害诱导的ACC合酶基因cDNA克隆 | 第73-74页 |
| ·pUC19-SACS克隆载体的构建 | 第74页 |
| ·大豆ACC合酶基因组序列克隆 | 第74-75页 |
| ·ACC合酶基因天然反义转录物RT-PCR鉴定 | 第75页 |
| ·ACC合酶基因正义、反义转录物Real time RT-PCR分析 | 第75页 |
| ·大豆基因组数据库序列比对 | 第75页 |
| ·实验结果 | 第75-82页 |
| ·大豆伤害诱导的ACC合酶基因cDNA | 第75-76页 |
| ·大豆ACC合酶基因组序列 | 第76页 |
| ·ACC合酶顺式反义转录物(cis-NATs) | 第76-77页 |
| ·大豆营养生长期天然反义转录物ASACS2与正义转录物SACS2伴随着积累 | 第77-78页 |
| ·获得序列的染色体定位 | 第78-82页 |
| ·讨论 | 第82页 |
| ·小结 | 第82-83页 |
| 5 大豆ACC合酶反义基因子房原位转化 | 第83-100页 |
| ·实验材料 | 第83-84页 |
| ·植物材料 | 第83页 |
| ·菌种及质粒 | 第83页 |
| ·酶及主要试剂 | 第83-84页 |
| ·实验方法 | 第84-87页 |
| ·pBI121-ASACS表达载体构建 | 第84页 |
| ·ACC合酶反义基因线性转化元件的构建 | 第84页 |
| ·大豆子房原位转化 | 第84页 |
| ·转化处理大豆及后代植株总DNA提取与PCR检测 | 第84-85页 |
| ·转基因的Southern杂交分析 | 第85页 |
| ·转基因后代遗传学分析 | 第85页 |
| ·转基因后代萌发期乙烯测量 | 第85页 |
| ·转基因后代植株ACC合酶活性以及幼苗生长测定 | 第85-86页 |
| ·转基因后代植株幼苗生长测定 | 第86-87页 |
| ·转基因后代株系乙烯效应性状以及产量相关性状田间调查 | 第87页 |
| ·转基因调查数据的统计学分析 | 第87页 |
| ·实验结果 | 第87-98页 |
| ·ACC合酶反义基因克隆载体及表达载体鉴定 | 第87-88页 |
| ·ACC合酶反义基因最小化线性转化元件 | 第88-89页 |
| ·ACC合酶反义基因大豆子房原位转化结果 | 第89页 |
| ·转化大豆的PCR分析 | 第89-91页 |
| ·转化大豆Southern blot分析 | 第91-94页 |
| ·转基因后代乙烯先升后降总量减少释放曲线 | 第94页 |
| ·转基因后代幼苗生长状况与ACC合酶活性升高相关 | 第94-95页 |
| ·转基因生长特征改变:营养生长期延长和结荚数增高等 | 第95-98页 |
| ·讨论 | 第98-99页 |
| ·小结 | 第99-100页 |
| 结论 | 第100-101页 |
| 创新点摘要 | 第101页 |
| 有待进一步开展的工作与展望 | 第101-103页 |
| 参考文献 | 第103-124页 |
| 附录A 本论文重要缩略词 | 第124页 |
| 附录B 两种转化路径转化率的t检验 | 第124-125页 |
| 附录C ACC合酶反义基因田间调查原始数据(部分) | 第125-127页 |
| 附录D 第五章边界序列引物与目的基因引物PCR本底条带分析 | 第127-128页 |
| 攻读博士学位期间发表学术论文情况 | 第128-129页 |
| 致谢 | 第129-131页 |
| 作者简介 | 第131-132页 |
