| 缩略语表 | 第1-11页 |
| 中文摘要 | 第11-13页 |
| 英文摘要 | 第13-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-46页 |
| 1 端粒及端粒酶的研究历史 | 第16-19页 |
| 1．1 端粒的发现与克隆 | 第16-18页 |
| 1．2 端粒酶的发现与鉴定及基因的克隆 | 第18-19页 |
| 2 端粒与端粒酶 | 第19-29页 |
| 2．1 端粒的结构与功能 | 第19-21页 |
| 2．2 端粒相关蛋白 | 第21-22页 |
| 2．3 端粒长度的调节 | 第22-24页 |
| 2．4 端粒酶的结构和功能 | 第24-26页 |
| 2．5 端粒酶活性检测 | 第26-29页 |
| 3 端粒、端粒酶与细胞寿命及肿瘤的关系 | 第29-31页 |
| 3．1 端粒、端粒酶与细胞寿命 | 第29-30页 |
| 3．2 端粒酶与肿瘤 | 第30-31页 |
| 4 端粒及端粒酶抑制剂的研究进展 | 第31-36页 |
| 4．1 控制端粒延长靶点的物质 | 第31-33页 |
| 4．2 抑制端粒酶结构和功能靶点的物质 | 第33-36页 |
| 5 端粒酶在肿瘤诊断和治疗中的意义 | 第36-37页 |
| 6 前景展望 | 第37-38页 |
| 7 本研究的设计思路与具体安排 | 第38-40页 |
| 参考文献 | 第40-46页 |
| 第二章 hTR基因的克隆及表达质粒的构建与序列分析 | 第46-63页 |
| 1 实验材料 | 第47-49页 |
| 1．1 主要仪器 | 第47页 |
| 1．2 主要试剂 | 第47页 |
| 1．3 细胞、质粒和培养基 | 第47-48页 |
| 1．4 引物的设计与合成 | 第48-49页 |
| 2 实验方法 | 第49-57页 |
| 2．1 细胞培养 | 第49页 |
| 2．2 总RNA提取 | 第49-51页 |
| 2．3 RT-PCR扩增目的DNA片段 | 第51-52页 |
| 2．4 hTR基因正义表达质粒的构建 | 第52-56页 |
| 2．5 hTR基因反义表达质粒的构建 | 第56-57页 |
| 3 结果与讨论 | 第57-61页 |
| 3．1 提取RNA的质量分析 | 第57页 |
| 3．2 RT-PCR扩增目的DNA片段的分析 | 第57-59页 |
| 3．3 鉴定hTR基因的正义和反义表达质粒 | 第59-60页 |
| 3．4 重组质粒的序列分析 | 第60-61页 |
| 4 小结 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-63页 |
| 第三章 hTR反义基因在肝癌SMMC-7721细胞中表达的研究 | 第63-76页 |
| 1 实验材料 | 第64页 |
| 2 实验方法 | 第64-67页 |
| 2．1 pLNCX-aTR质粒转入肝癌细胞 | 第64页 |
| 2．2 Southern blot分析 | 第64-65页 |
| 2．3 TRAP-银染法检测端粒酶活性 | 第65页 |
| 2．4 凋亡细胞的形态观察 | 第65-66页 |
| 2．5 细胞生长及倍增时间的测定 | 第66页 |
| 2．6 统计学处理 | 第66页 |
| 2．7 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第66-67页 |
| 2．8 凋亡细胞特征性DNA条带 | 第67页 |
| 3 结果与讨论 | 第67-74页 |
| 3．1 Southern杂交分析外源基因的整合 | 第67-68页 |
| 3．2 反义hTR基因对端粒酶活性的影响 | 第68-69页 |
| 3．3 反义hTR基因对肝癌细胞凋亡的影响 | 第69-73页 |
| 3．4 反义hTR基因在肿瘤治疗中的意义 | 第73-74页 |
| 4 小结 | 第74页 |
| 参考文献 | 第74-76页 |
| 第四章 hTR基因在人体正常外周血白细胞中表达的研究 | 第76-91页 |
| 1 实验材料 | 第76-77页 |
| 1．1 细胞和质粒 | 第76-77页 |
| 1．2 引物 | 第77页 |
| 1．3 主要试剂 | 第77页 |
| 2 实验方法 | 第77-80页 |
| 2．1 重组质粒转染白细胞 | 第77-78页 |
| 2．2 PCR鉴定和Southern blot分析 | 第78页 |
| 2．3 DNA测序法检测RNA | 第78-80页 |
| 2．4 DNA测序法检测端粒酶活性 | 第80页 |
| 2．5 流式细胞术分析 | 第80页 |
| 3 结果与讨论 | 第80-88页 |
| 3．1 PCR与Southern杂交分析 | 第80-82页 |
| 3．2 DNA测序法检测hTR基因的RNA | 第82-84页 |
| 3．3 端粒酶活性检测 | 第84-85页 |
| 3．4 流式细胞术分析细胞生长 | 第85-86页 |
| 3．5 hTR与端粒酶活性的关系 | 第86-88页 |
| 4 小结 | 第88页 |
| 参考文献 | 第88-91页 |
| 第五章 应用DNA测序技术定量检测端粒酶活性的研究 | 第91-110页 |
| 1 实验材料 | 第92-93页 |
| 1．1 细胞 | 第92页 |
| 1．2 引物 | 第92页 |
| 1．3 主要药品、试剂和仪器 | 第92-93页 |
| 2 实验方法 | 第93-97页 |
| 2．1 细胞培养和蛋白提取液的制备 | 第93-94页 |
| 2．2 处理蛋白提取液 | 第94页 |
| 2．3 端粒酶活性检测 | 第94-97页 |
| 3 结果与讨论 | 第97-108页 |
| 3．1 方法的特异性和敏感性 | 第97-100页 |
| 3．2 端粒酶活性与细胞数量的关系 | 第100-103页 |
| 3．3 不同种细胞的端粒酶活性 | 第103-104页 |
| 3．4 DNA测序法与银染法的比较 | 第104-106页 |
| 3．5 DNA测序法检测端粒酶活性的特点 | 第106-108页 |
| 4 小结 | 第108页 |
| 参考文献 | 第108-110页 |
| 第六章 结论与展望 | 第110-113页 |
| 1 主要结论 | 第110-111页 |
| 2 创新点 | 第111-112页 |
| 3 有待于进一步开展的工作 | 第112-113页 |
| 附录 | 第113-117页 |
| 发表论文 | 第117-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
