| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-24页 |
| ·脂肪酶的研究进展 | 第12-20页 |
| ·脂肪酶简介 | 第12-13页 |
| ·脂肪酶的理化性质 | 第13-15页 |
| ·脂肪酶的结构及催化机制 | 第15-16页 |
| ·脂肪酶的应用研究 | 第16-18页 |
| ·微生物脂肪酶的开发及产量、活性和稳定性的提高 | 第18-20页 |
| ·白假丝酵母脂肪酶研究现状 | 第20-22页 |
| ·白假丝酵母 | 第20页 |
| ·白假丝酵母脂肪酶的研究现状 | 第20-22页 |
| ·本课题的研究意义及技术路线 | 第22-24页 |
| ·本课题的研究意义 | 第22页 |
| ·本课题的技术路线 | 第22-24页 |
| 第二章 白假丝酵母脂肪酶基因的克隆及定点突变 | 第24-37页 |
| ·引言 | 第24页 |
| ·材料及设备 | 第24-26页 |
| ·菌株及质粒 | 第24页 |
| ·培养基与溶液配制 | 第24-25页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·主要仪器 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-31页 |
| ·白假丝酵母的培养及基因组的提取 | 第26页 |
| ·脂肪酶基因 lip10 的扩增及鉴定 | 第26-29页 |
| ·脂肪酶基因 lip10 的定点突变 | 第29-31页 |
| ·结果与讨论 | 第31-35页 |
| ·白假丝酵母脂肪酶基因 lip10 的克隆 | 第31-33页 |
| ·白假丝酵母脂肪酶基因 lip10 的序列分析 | 第33页 |
| ·白假丝酵母脂肪酶基因 lip10 的定点突变 | 第33-35页 |
| 本章小结 | 第35-37页 |
| 第三章 CALIP10 在毕赤酵母中的重组优化表达 | 第37-54页 |
| ·引言 | 第37页 |
| ·材料及设备 | 第37-39页 |
| ·菌种与质粒 | 第37页 |
| ·培养基与溶液配制 | 第37-38页 |
| ·主要试剂 | 第38-39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-44页 |
| ·毕赤酵母重组表达载体 pGAPZαA-lip10/lip10-dm 的构建 | 第39-40页 |
| ·毕赤酵母重组子的构建及筛选 | 第40-42页 |
| ·CaLIP10 的表达验证 | 第42-43页 |
| ·重组酵母 X33-pGAPZαA-Calip10 的生长曲线及酶活变化情况测定 | 第43页 |
| ·重组酵母培养条件的优化 | 第43-44页 |
| ·结果与讨论 | 第44-53页 |
| ·毕赤酵母重组表达质粒 pGAPZαA-lip10/lip10-dm 的构建 | 第44-45页 |
| ·毕赤酵母重组子的构建及筛选 | 第45页 |
| ·CaLIP10 的重组表达验证 | 第45-47页 |
| ·重组酵母 X33-pGAPZαA-Calip10 的生长曲线及酶活变化情况测定 | 第47页 |
| ·重组酵母培养条件优化的实验设计 | 第47-49页 |
| ·统计分析 | 第49页 |
| ·各因素对 CaLIP10 酶活的影响及最优条件确定 | 第49-53页 |
| ·重组 CaLIP10 表达的最优条件验证 | 第53页 |
| 本章小结 | 第53-54页 |
| 第四章 CALIP10 的纯化及酶的性质研究 | 第54-68页 |
| ·引言 | 第54页 |
| ·材料与设备 | 第54-56页 |
| ·菌株 | 第54页 |
| ·溶液 | 第54-55页 |
| ·试剂 | 第55-56页 |
| ·主要设备 | 第56页 |
| ·实验方法 | 第56-59页 |
| ·粗酶液制备 | 第56页 |
| ·CaLIP10 的纯化 | 第56-57页 |
| ·CaLIP10 的底物特异性 | 第57页 |
| ·CaLIP10 的最适温度及温度稳定性 | 第57页 |
| ·CaLIP10 的最适 pH 及 pH 稳定性 | 第57页 |
| ·金属离子对 CaLIP10 活性的影响 | 第57-58页 |
| ·表面活性剂对 CaLIP10 活性的影响 | 第58页 |
| ·有机溶剂对 CaLIP10 活性的影响 | 第58页 |
| ·CaLIP10 的动力学常数测定 | 第58页 |
| ·CaLIP10 对椰子油的水解性能分析 | 第58-59页 |
| ·结果与讨论 | 第59-66页 |
| ·CaLIP10 的纯化 | 第59-60页 |
| ·CaLIP10 的底物特异性 | 第60页 |
| ·CaLIP10 的最适反应温度及温度稳定性 | 第60-61页 |
| ·CaLIP10 的最适 pH 及 pH 稳定性 | 第61-62页 |
| ·金属离子对 CaLIP10 活性的影响 | 第62-63页 |
| ·表面活性剂对 CaLIP10 活性的影响 | 第63-64页 |
| ·有机溶剂对 CaLIP10 活性的影响 | 第64-65页 |
| ·CaLIP10 的动力学常数测定 | 第65页 |
| ·GC 和 HPLC 分析椰子油水解产物 | 第65-66页 |
| 本章小结 | 第66-68页 |
| 结论 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-77页 |
| 附录 | 第77-82页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 附件 | 第84页 |
