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猪脑心肌炎病毒TJ株2C基因的克隆表达及ELISA检测方法的建立

摘要第1-5页
ABSTRACT第5-10页
第一章 猪脑心肌炎病毒的研究进展第10-23页
   ·猪脑心肌炎的分子生物学研究进展第10-17页
     ·病毒粒子第10-11页
     ·病毒基因组结构第11-14页
     ·病毒蛋白的裂解第14-15页
     ·病毒基因组同源性、系统进化及其遗传变异第15-17页
   ·EMCV 理化特性第17页
   ·EMCV 的分离第17-18页
     ·细胞分离第17-18页
     ·组织分离第18页
   ·EMCV 致病性第18-19页
   ·EMCV 感染的临床症状及病理变化第19-20页
   ·EMCV 的流行情况及流行特点第20-21页
   ·疾病诊断第21页
   ·疾病防治第21-23页
第二章 EMCV TJ 株2C 基因的克隆与分析第23-45页
   ·材料第23-26页
     ·毒株及细胞第23页
     ·试剂第23页
     ·主要仪器及设备第23-24页
     ·主要用液的配置第24-26页
   ·方法第26-29页
     ·病毒增殖第26页
     ·RT-PCR 鉴定第26-27页
     ·2C 基因的克隆与测序第27-29页
   ·结果第29-42页
     ·细胞增毒鉴定第29页
     ·RT-PCR 鉴定结果第29页
     ·2C 基因的扩增第29-30页
     ·2C 基因TJ 株测序结果及同源性分析第30-41页
     ·EMCV TJ 株2C 蛋白二级结构和抗原表位第41-42页
   ·讨论第42-43页
     ·EMCV 的细胞培养特性第42页
     ·EMCV 的鉴定第42-43页
     ·2C 基因及其编码的蛋白第43页
   ·小结第43-45页
第三章 EMCV TJ 株2C 基因的原核表达与纯化第45-59页
   ·材料第45-49页
     ·主要试剂第45页
     ·主要仪器和设备第45-46页
     ·主要试剂的配制第46-49页
   ·方法第49-54页
     ·目的基因2C 的克隆第49-50页
     ·目的基因与表达载体质粒pGEX-6P-1 的酶切第50页
     ·目的基因与载体DNA 的连接与转化第50-51页
     ·质粒DNA 提取-碱裂解法第51-52页
     ·质粒DNA 的鉴定第52页
     ·基因工程重组表达菌的诱导表达第52-53页
     ·2C 重组蛋白的纯化回收第53页
     ·重组蛋白的鉴定第53-54页
   ·结果第54-58页
     ·2C 基因的扩增和表达质粒pGEX-6P-2C 的鉴定第54页
     ·序列测定第54-55页
     ·基因工程重组菌的诱导表达和SDS-PAGE 电泳分析第55-56页
     ·2C 蛋白的洗涤纯化第56-57页
     ·2C 蛋白含量的测定第57-58页
   ·讨论第58页
   ·小结第58-59页
第四章 检测EMCV 抗体的间接ELISA 方法的初步建立及应用第59-70页
   ·材料第59-60页
     ·ELISA 用试剂与溶液的配置第59-60页
     ·主要仪器第60页
   ·方法第60-61页
     ·间接ELISA 最适反应条件的确定第60-61页
     ·重复性试验第61页
     ·天津地区猪场的血清学调查第61页
     ·2C 蛋白与VP1 蛋白EMCV 抗体检测的比较第61页
   ·结果与分析第61-67页
     ·抗原最佳工作浓度的确定第61-62页
     ·酶标二抗最佳稀释度的确定第62-63页
     ·被检血清最佳稀释度的确定第63-64页
     ·阴阳性血清临界值的确定第64-65页
     ·血清的重复性试验第65页
     ·天津地区猪场EMCV 感染情况第65-66页
     ·2C 蛋白与VP1 蛋白ELISA 检测结果的比较第66-67页
   ·讨论第67-69页
     ·EMCV 检测方法分析第67-68页
     ·2C 蛋白与VP1 蛋白检测EMCV 抗体的差异性比较第68页
     ·我国 EMCV 感染情况及公共卫生学意义第68-69页
   ·小结第69-70页
结论第70-71页
参考文献第71-77页
缩略词第77-78页
致谢第78-79页
作者简介第79页

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