| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-64页 |
| ·产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli, ETEC) | 第16-29页 |
| ·ETEC 黏附素 | 第17-21页 |
| ·F4 (K88) 菌毛 | 第18-19页 |
| ·F18 菌毛 | 第19-20页 |
| ·AIDA (adhesin involved in diffuse adherence). | 第20页 |
| ·Paa (porcine attaching and effacing associated) | 第20-21页 |
| ·ETEC 产生的肠毒素 | 第21-25页 |
| ·不耐热肠毒素LT (heat-labile enterotoxin) | 第21-22页 |
| ·耐热肠毒素STa (heat-stable enterotoxin a) | 第22-23页 |
| ·肠凝集性大肠杆菌耐热肠毒素I (EAST1) | 第23-24页 |
| ·耐热肠毒素STb (heat-stable enterotoxin b). | 第24-25页 |
| ·ETEC 的致病机理 | 第25-29页 |
| ·ETEC 向小肠的定植 | 第25-27页 |
| ·肠毒素导致腹泻的机理 | 第27-29页 |
| ·细菌的群体感应(Quorum sensing) | 第29-42页 |
| ·革兰氏阴性和阳性细菌的群体感应 | 第30-36页 |
| ·革兰氏阴性菌的群体感应 | 第30-34页 |
| ·革兰氏阳性菌的群体感应 | 第34-36页 |
| ·LuxS/AI-2 群体感应系统 | 第36-39页 |
| ·AI-3/肾上腺素/去甲肾上腺素群体感应系统 | 第39-42页 |
| ·乳酸菌 | 第42-50页 |
| ·乳酸菌干扰肠道感染的原理 | 第43-44页 |
| ·乳酸菌抵抗病原菌的作用机制 | 第44-50页 |
| ·乳酸菌增强肠屏障功能 | 第44-45页 |
| ·乳酸菌对抗病原菌的黏附作用 | 第45-46页 |
| ·乳酸菌对抗病原菌向肠上皮细胞侵袭的作用 | 第46-47页 |
| ·乳酸菌的抗菌特性 | 第47-48页 |
| ·乳酸菌的抗毒素作用 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-64页 |
| 第二章 群体感应在产肠毒素大肠杆菌导致的肠上皮细胞损伤中的作用 | 第64-107页 |
| 引言 | 第64-66页 |
| ·材料与方法 | 第66-79页 |
| ·细菌的培养 | 第66-67页 |
| ·病原菌ETEC K88 菌株JG280 | 第66-67页 |
| ·非病原菌E. coli K88 菌株JFF4 | 第67页 |
| ·用于检测AI-2 (autoinducer-2, 自体诱导物) 活性的细菌 | 第67页 |
| ·猪小肠上皮细胞(IPEC-J2) 培养 | 第67-68页 |
| ·IPEC-J2 细胞的常规培养 | 第67-68页 |
| ·培养IPEC-J2 细胞用于实验. | 第68页 |
| ·IPEC-J2 细胞F4ab/ac 受体编码基因的检测 | 第68-69页 |
| ·显微镜镜检实验 | 第69-70页 |
| ·IPEC-J2 细胞和ETEC K88 菌株JG280 共培养 | 第69页 |
| ·IPEC-J2 细胞的固定和染色. | 第69-70页 |
| ·细胞毒性实验 | 第70-71页 |
| ·IPEC-J2 细胞和ETEC K88 菌株JG280 共培养 | 第70页 |
| ·裂解IPEC-J2 细胞 | 第70页 |
| ·细胞毒性检测 | 第70-71页 |
| ·细胞活力鉴定 | 第71-72页 |
| ·IPEC-J2 细胞和ETEC K88 菌株JG280 共培养 | 第72页 |
| ·台盼蓝拒染实验 | 第72页 |
| ·ETEC K88 菌株JG280 的定量分析. | 第72-73页 |
| ·luxS 基因克隆和表达 | 第73-75页 |
| ·ETEC K88 菌株JG280 基因组DNA 的提取 | 第73页 |
| ·luxS 基因的PCR 扩增 | 第73-74页 |
| ·luxS 基因的过量表达 | 第74-75页 |
| ·制备细胞培养无菌上清液 | 第75页 |
| ·AI-2 活性的测定 | 第75-76页 |
| ·制备测定培养液 | 第75页 |
| ·测定AI-2 活性 | 第75-76页 |
| ·RNA 提取 | 第76-77页 |
| ·菌体的处理 | 第76页 |
| ·细菌总RNA 的提取和RNA 质量的检测. | 第76-77页 |
| ·逆转录PCR 和荧光定量PCR | 第77-78页 |
| ·逆转录PCR | 第77页 |
| ·荧光定量PCR | 第77-78页 |
| ·荧光定量PCR 数据处理 | 第78页 |
| ·ETEC K88 菌株JG280 毒力基因表达和AI-2 活性的关系 | 第78-79页 |
| ·统计分析 | 第79页 |
| ·结果 | 第79-97页 |
| ·检测IPEC-J2 细胞F4ab/ac 受体编码基因 | 第79-81页 |
| ·ETEC K88 菌株JG280 导致的IPEC-J2 细胞损伤 | 第81-86页 |
| ·ETEC K88 菌株JG280 产生的AI-2 活性 | 第86-88页 |
| ·ETEC 的AI-2 活性和毒力基因表达的关系 | 第88-91页 |
| ·克隆JZ-luxS 分泌的AI-2 活性 | 第91-94页 |
| ·外源性AI-2 对ETEC 诱导的细胞损伤的影响 | 第94-95页 |
| ·外源性AI-2 对ETEC 毒力基因表达的影响 | 第95-97页 |
| ·讨论 | 第97-102页 |
| ·本章小结 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-107页 |
| 第三章 乳酸菌保护肠上皮细胞免受产肠毒素大肠杆菌侵染的作用机制 | 第107-140页 |
| 引言 | 第107-109页 |
| ·材料与方法 | 第109-116页 |
| ·细菌的培养 | 第109-110页 |
| ·致病菌ETEC K88 菌株JG280 | 第109页 |
| ·非致病菌E. coli K88 菌株JFF4 | 第109页 |
| ·乳酸菌 | 第109-110页 |
| ·乳酸菌的培养 | 第109-110页 |
| ·乳酸菌的计数 | 第110页 |
| ·IPEC-J2 细胞培养 | 第110-111页 |
| ·IPEC-J2 细胞的常规培养 | 第110页 |
| ·培养IPEC-J2 细胞用于实验 | 第110-111页 |
| ·显微镜镜检实验 | 第111页 |
| ·IPEC-J2 细胞、ETEC K88 菌株JG280 及乳酸菌共培养. | 第111页 |
| ·IPEC-J2 细胞固定和染色 | 第111页 |
| ·细胞毒性实验 | 第111-112页 |
| ·IPEC-J2 细胞、ETEC K88 菌株JG280 及乳酸菌共培养. | 第111页 |
| ·裂解IPEC-J2 细胞 | 第111-112页 |
| ·细胞毒性检测 | 第112页 |
| ·细胞活力鉴定 | 第112-113页 |
| ·IPEC-J2 细胞和ETEC K88 菌株JG280 共培养 | 第112页 |
| ·台盼蓝拒染实验 | 第112-113页 |
| ·乳酸菌CL9 对ETEC K88 菌株JG280 毒力基因表达的影响 | 第113-115页 |
| ·乳酸菌CL9、IPEC-J2 细胞及ETEC K88 菌株JG280 共培养 | 第113页 |
| ·RNA 提取 | 第113-114页 |
| ·菌体的处理 | 第113页 |
| ·细菌总RNA 的提取和RNA 质量的检测 | 第113-114页 |
| ·逆转录PCR 和定量PCR | 第114-115页 |
| ·逆转录PCR | 第114页 |
| ·荧光定量PCR | 第114页 |
| ·荧光定量PCR 数据处理 | 第114-115页 |
| ·乳酸菌对ETEC K88 菌株JG280 AI-2 活性的影响 | 第115-116页 |
| ·制备用于测定AI-2 活性的无菌上清液 | 第115页 |
| ·制备测定培养液 | 第115页 |
| ·AI-2 活性的测定 | 第115-116页 |
| ·IPEC-J2 细胞分泌的细胞因子的测定(ELISA) | 第116页 |
| ·制备用于测定细胞因子的上清液 | 第116页 |
| ·ELISA 测定细胞因子IL-8 和IL-10 | 第116页 |
| ·统计分析 | 第116页 |
| ·结果 | 第116-133页 |
| ·ETEC K88 菌株 JG280 导致的 IPEC-J2 细胞损伤 | 第116-119页 |
| ·IPEC-J2 细胞和乳酸菌共培养后的细胞形态 | 第119-123页 |
| ·ETEC 和 IPEC-J2 细胞、乳酸菌共培养后的细胞毒性 | 第123-125页 |
| ·乳酸菌 CL9 抑制 ETEC K88 菌株 JG280 毒力基因的表达 | 第125-127页 |
| ·乳酸菌对 IPEC-J2 细胞分泌细胞因子的影响 | 第127-130页 |
| ·乳酸菌对 ETEC K88 菌株 JG280 分泌 AI-2 的影响 | 第130-133页 |
| ·讨论 | 第133-136页 |
| ·本章小结 | 第136-137页 |
| 参考文献 | 第137-140页 |
| 总结与展望 | 第140-141页 |
| 论文创新点 | 第141-142页 |
| 附录 1 溶液及培养基配方 | 第142-143页 |
| 附录 2 仪器设备 | 第143-144页 |
| 致谢 | 第144-145页 |
| 已(待)发表的学术文章及参加的科研课题 | 第145-146页 |
| 已(待)发表的论文 | 第145-146页 |
| 学术会议论文 | 第146页 |
| 参加的科研课题 | 第146页 |
