| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-12页 |
| 英文缩写一览表 | 第12-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-43页 |
| ·转基因植物 | 第14-15页 |
| ·全球转基因作物商业化种植、应用现状 | 第15-17页 |
| ·转基因生物安全性评价和管理 | 第17-24页 |
| ·主要国际组织对于转基因生物的安全管理 | 第18-20页 |
| ·国际食品法典委员会 (CAC) | 第18页 |
| ·经济发展合作组织 (OECD) | 第18-19页 |
| ·国际作物生命协会 (CropLife International) | 第19-20页 |
| ·国际标准化组织 (ISO) | 第20页 |
| ·主要国家对转基因生物的安全管理 | 第20-24页 |
| ·欧盟 | 第21-22页 |
| ·美国 | 第22页 |
| ·日本 | 第22-23页 |
| ·中国 | 第23-24页 |
| ·转基因及其产品检测方法 | 第24-40页 |
| ·基于蛋白质的检测技术 | 第25-26页 |
| ·基于核酸的DNA 扩增、产物检测技术 | 第26-36页 |
| ·植物基因组DNA 提取和纯化 | 第27页 |
| ·基因组DNA 浓度测定和评价 | 第27-28页 |
| ·植物基因组DNA 质量和拷贝数换算 | 第28页 |
| ·内标准基因和阳性参考物质 | 第28-30页 |
| ·定性PCR 检测方法 | 第30-31页 |
| ·定量PCR 检测方法 | 第31-34页 |
| ·竞争性定量PCR | 第32页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第32-34页 |
| ·核酸等温扩增技术 | 第34-35页 |
| ·DNA 芯片或DNA 微阵列 (DNA Microarrays) 技术 | 第35-36页 |
| ·生物传感器 (Biosensors) | 第36页 |
| ·转基因植物检测技术标准化 | 第36-37页 |
| ·转基因产品检测方法数据库 | 第37-38页 |
| ·未批准转基因植物检测 | 第38页 |
| ·转基因植物及产品检测方法发展趋势及展望 | 第38-40页 |
| ·本课题研究的目的、内容和意义 | 第40-43页 |
| 第二章 番木瓜内源参照基因及“华农1 号”转基因番木瓜品系特异性检测方法研究 | 第43-73页 |
| ·实验材料、试剂与仪器 | 第44-45页 |
| ·植物材料 | 第44页 |
| ·常用试剂 | 第44-45页 |
| ·主要仪器设备 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-54页 |
| ·植物基因组DNA 提取和纯化 | 第45-46页 |
| ·基因组DNA 浓度测定和评价 | 第46页 |
| ·番木瓜内源参照基因检测方法建立 | 第46-51页 |
| ·番木瓜内源参照基因的查找 | 第46-48页 |
| ·番木瓜内源参照基因定性、定量PCR 引物设计 | 第48页 |
| ·CHY 基因定性PCR 反应体系和条件 | 第48页 |
| ·CHY 基因定量PCR 反应体系和条件 | 第48-49页 |
| ·CHY 内源参照基因的PCR 验证 | 第49-50页 |
| ·CHY 内源参照基因种内非特异性验证 | 第49页 |
| ·CHY 基因种间特异性验证 | 第49页 |
| ·CHY 基因拷贝数评估 | 第49-50页 |
| ·CHY 基因特异性PCR 检测灵敏度 | 第50页 |
| ·CHY 基因在转基因番木瓜检测中的应用 | 第50-51页 |
| ·“华农1 号”番木瓜品系特异性定性、定量检测方法研究 | 第51-54页 |
| ·“华农1 号”番木瓜外源插入基因及其旁邻序列信息分析 | 第51-52页 |
| ·“华农1 号”番木瓜品系特异性PCR 引物、探针设计 | 第52页 |
| ·定性、定量PCR 反应体系和反应条件的建立 | 第52-54页 |
| ·定性PCR 反应体系和条件 | 第52-54页 |
| ·定量PCR 反应体系和条件 | 第54页 |
| ·结果与分析 | 第54-71页 |
| ·番木瓜内源参照基因检测方法建立 | 第54-62页 |
| ·番木瓜内源参照基因的筛选 | 第54-55页 |
| ·CHY 内源参照基因的验证 | 第55-57页 |
| ·CHY 基因种间特异性鉴定 | 第55页 |
| ·CHY 基因种内非特异性检测 | 第55-56页 |
| ·CHY 基因在番木瓜中的拷贝数评估 | 第56-57页 |
| ·CHY 基因测序分析 | 第57-58页 |
| ·CHY 基因定性PCR 的灵敏度 | 第58页 |
| ·CHY 基因定量PCR 检测 | 第58-60页 |
| ·定量PCR 检测体系的检测极限(LOD) 和定量极限(Limit of Quantitation, LOQ)。 | 第58-59页 |
| ·标准曲线构建 | 第59-60页 |
| ·定量PCR 检测体系的重复性和重演性 | 第60页 |
| ·番木瓜内源参照基因CHY 可应用性检测 | 第60-62页 |
| ·“华农1 号”番木瓜品系特异性定性、定量检测方法研究 | 第62-71页 |
| ·“华农1 号”番木瓜外源基因表达框的结构和序列信息 | 第62-65页 |
| ·外源整合序列的特征描述 | 第65-67页 |
| ·“华农1 号”番木瓜品系特异性定性PCR 检测方法 | 第67-68页 |
| ·“华农1 号”番木瓜品系特异性定量检测方法 | 第68-70页 |
| ·定量PCR 检测体系的LOD 和LOQ | 第69页 |
| ·标准曲线构建 | 第69-70页 |
| ·品系特异性定量PCR 检测体系的重复性和重演性 | 第70页 |
| ·应用建立的品系特异性检测方法对实际转基因番木瓜样品的定量分析 | 第70-71页 |
| ·本章小结和讨论 | 第71-73页 |
| 第三章 基于复合兼并引物PCR 的转基因作物高通量筛选检测方法研究 | 第73-89页 |
| ·实验材料、试剂与仪器 | 第74-75页 |
| ·植物材料 | 第74页 |
| ·常用试剂 | 第74页 |
| ·主要仪器设备 | 第74-75页 |
| ·实验方法 | 第75-79页 |
| ·植物基因组DNA 提取和纯化 | 第75页 |
| ·基因组DNA 浓度测定和评价 | 第75页 |
| ·DNA 样品制备 | 第75-77页 |
| ·外源插入基因基因序列分析 | 第77页 |
| ·兼并PCR 引物设计 | 第77-78页 |
| ·兼并PCR 扩增体系的建立 | 第78页 |
| ·兼并PCR 扩增方法验证 | 第78-79页 |
| ·兼并PCR 扩增方法特异性验证 | 第78-79页 |
| ·兼并PCR 扩增方法灵敏度检测 | 第79页 |
| ·复合兼并PCR 扩增方法检测实际样品 | 第79页 |
| ·结果与分析 | 第79-88页 |
| ·外源插入基因基因序列分析 | 第79-82页 |
| ·mCry3A 和Cry3Bb1 基因序列分析 | 第80-81页 |
| ·CP4-EPSPS 基因序列分析 | 第81页 |
| ·bar 和pat 基因序列分析 | 第81-82页 |
| ·Cry1Ab、Cry1Ac 和Cry1A(b/c)基因序列分析 | 第82页 |
| ·兼并PCR 扩增方法建立 | 第82-86页 |
| ·兼并PCR 扩增方法特异性验证 | 第82-85页 |
| ·mCry3-F/R PCR 反应体系特异性检测 | 第82-83页 |
| ·mCP4ES-F/R PCR 反应体系特异性检测 | 第83页 |
| ·mPAT-F/R PCR 反应体系特异性检测 | 第83-84页 |
| ·mCry1A-F/R PCR 反应体系特异性检测 | 第84页 |
| ·复合兼并引物PCR 方法特异性检测 | 第84-85页 |
| ·兼并PCR 扩增方法灵敏度检测 | 第85-86页 |
| ·实际样品检测评估4 重复合兼并PCR 扩增方法的可应用性 | 第86-88页 |
| ·本章小结和讨论 | 第88-89页 |
| 第四章 MPIC：一种新的基于毛细管凝胶电泳检测的微滴聚合酶链式反应分析方法研究 | 第89-107页 |
| ·实验材料、试剂与仪器 | 第90-91页 |
| ·植物材料 | 第90页 |
| ·试剂 | 第90-91页 |
| ·主要仪器设备 | 第91页 |
| ·实验方法 | 第91-98页 |
| ·植物基因组DNA 提取和纯化 | 第91-92页 |
| ·基因组DNA 浓度测定和评价 | 第92页 |
| ·DNA 样品制备 | 第92-93页 |
| ·通用引物设计 | 第93页 |
| ·目标特异性引物设计 | 第93-95页 |
| ·单重PCR 扩增体系和程序 | 第95页 |
| ·MPIC 方法的建立 | 第95-97页 |
| ·复合模板的合成 | 第95-96页 |
| ·微滴制备 | 第96-97页 |
| ·微滴PCR 扩增 | 第97页 |
| ·毛细管凝胶电泳检测微滴PCR 产物 | 第97页 |
| ·MPIC 方法的实际应用性检测 | 第97-98页 |
| ·结果与分析 | 第98-106页 |
| ·MPIC 方法的设计和原理 | 第98-99页 |
| ·MPIC 方法中微滴的热稳定性评估 | 第99页 |
| ·MPIC 方法优化 | 第99-102页 |
| ·DNA 聚合酶的选择 | 第100-101页 |
| ·引物浓度 | 第101页 |
| ·纯化/不纯化复合模板对MPIC 方法的影响 | 第101-102页 |
| ·预扩增循环数对MPIC 的影响 | 第102页 |
| ·八重MPIC 方法中PCR 扩增特异性检测 | 第102-103页 |
| ·八重MPIC 方法方法灵敏度检测 | 第103页 |
| ·MPIC 方法的灵活性 | 第103-104页 |
| ·实际样品检测评估MPIC 方法的可应用性 | 第104-106页 |
| ·本章小结和讨论 | 第106-107页 |
| 第五章 结论 | 第107-108页 |
| 参考文献 | 第108-127页 |
| 附录 | 第127-131页 |
| 致谢 | 第131-132页 |
| 攻读博士学位期间已发表或录用的论文 | 第132-136页 |
| 附件 | 第136页 |
