食品级乳酸乳球菌表面展示系统的构建与性能分析
| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-37页 |
| ·乳酸菌及其表达系统概述 | 第12-18页 |
| ·乳酸菌概述 | 第12-13页 |
| ·乳酸菌食品级表达系统 | 第13页 |
| ·食品级诱导物 | 第13-14页 |
| ·食品级筛选标记 | 第14-18页 |
| ·显性选择标记 | 第15-17页 |
| ·互补选择标记 | 第17-18页 |
| ·外源基因导入乳酸菌的方法 | 第18页 |
| ·细菌表面展示技术及应用进展 | 第18-22页 |
| ·表面展示技术的概念 | 第18-19页 |
| ·细菌表面展示体系的构成 | 第19-20页 |
| ·运载蛋白 | 第19页 |
| ·靶蛋白 | 第19-20页 |
| ·宿主菌 | 第20页 |
| ·细菌表面展示技术的应用 | 第20-22页 |
| ·在疫苗研制中的应用 | 第20页 |
| ·做为全细胞催化剂的应用 | 第20-21页 |
| ·在蛋白质文库的筛选中的应用 | 第21页 |
| ·做为全细胞吸附剂及降解剂的应用 | 第21页 |
| ·其它方面的应用 | 第21-22页 |
| ·β-1,3-1,4-葡聚糖酶简介 | 第22-25页 |
| ·β-葡聚糖酶来源 | 第22-23页 |
| ·β-葡聚糖酶的应用现状 | 第23-25页 |
| ·在啤酒工业上的应用 | 第23页 |
| ·在饲料生产中的应用 | 第23-24页 |
| ·在生物防治中的应用 | 第24-25页 |
| ·乳酸乳球菌自溶素研究进展 | 第25-32页 |
| ·乳酸菌细胞壁肽聚糖结构 | 第25-26页 |
| ·乳酸菌自溶素的分类和作用 | 第26-27页 |
| ·乳酸乳球菌AcmA研究进展 | 第27-29页 |
| ·利用AcmA表达外源蛋白研究进展 | 第29-31页 |
| ·乳酸乳球菌中其他自溶素的研究 | 第31-32页 |
| ·基因敲除技术研究进展 | 第32-36页 |
| ·基因敲除的概念 | 第32-33页 |
| ·微生物中常用的基因敲除系统 | 第33-36页 |
| ·大肠杆菌中的基因打靶系统 | 第34-35页 |
| ·酵母中常用的基因打靶系统 | 第35-36页 |
| ·其他微生物中常用的基因打靶系统 | 第36页 |
| ·基因敲除的主要技术 | 第36页 |
| ·研究的目的和意义 | 第36-37页 |
| 2 材料与方法 | 第37-50页 |
| ·实验材料 | 第37-39页 |
| ·菌株和质粒 | 第37页 |
| ·培养基 | 第37-38页 |
| ·实验试剂及仪器 | 第38-39页 |
| ·主要实验试剂 | 第38页 |
| ·主要仪器 | 第38-39页 |
| ·实验方法 | 第39-50页 |
| ·acmA基因的BLAST分析和比对 | 第39页 |
| ·总DNA的抽提 | 第39页 |
| ·acmAas基因的扩增 | 第39-40页 |
| ·引物设计 | 第39页 |
| ·PCR扩增 | 第39-40页 |
| ·PCR产物的检测,回收和连接 | 第40页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备和转化 | 第40-41页 |
| ·转化子的检测和测序 | 第41-42页 |
| ·大肠杆菌转化子的快检 | 第41页 |
| ·大肠杆菌质粒的抽提 | 第41页 |
| ·质粒的酶切验证 | 第41-42页 |
| ·acmAas基因的比对分析和蛋白质结构的预测 | 第42页 |
| ·acmAasC基因的扩增 | 第42-43页 |
| ·引物设计 | 第42页 |
| ·PCR扩增及测序 | 第42-43页 |
| ·同源重组质粒pMB257的构建 | 第43-45页 |
| ·pMB256的构建 | 第43-44页 |
| ·质粒pMB257的构建 | 第44-45页 |
| ·乳酸乳球菌感受态的制备和转化 | 第45-46页 |
| ·转化子的检测 | 第46-47页 |
| ·MB257生物活性检测 | 第47页 |
| ·生长曲线的测定 | 第47页 |
| ·相差显微镜的观察 | 第47页 |
| ·扫描电镜的观察 | 第47页 |
| ·GLS活性的平板检测 | 第47-48页 |
| ·细胞表面展示GLS同源重组质粒的构建 | 第48-50页 |
| ·acmAasC1和acmAasC2的扩增 | 第48页 |
| ·gls的扩增 | 第48页 |
| ·pMB258的构建 | 第48-49页 |
| ·pMB259的构建 | 第49页 |
| ·pMB260的构建 | 第49-50页 |
| ·pMB260转化乳酸乳球菌 | 第50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-62页 |
| ·acmA的BLAST分析和比对分析 | 第50-52页 |
| ·总DNA的抽提和acmAas基因的扩增 | 第52-53页 |
| ·总DNA的抽提 | 第52页 |
| ·acmAas基因的扩增 | 第52-53页 |
| ·acmAas基因的比对分析和蛋白质结构预测 | 第53-55页 |
| ·acmAasC基因的扩增和同源重组质粒的构建 | 第55-57页 |
| ·acmAasC基因的扩增 | 第55-56页 |
| ·同源重组质粒的构建 | 第56-57页 |
| ·重组转化子的检测 | 第57-58页 |
| ·MB257生物活性的检测 | 第58-60页 |
| ·相差显微镜观察 | 第58-59页 |
| ·扫描电镜观察 | 第59页 |
| ·生长曲线的测定 | 第59-60页 |
| ·GLS活性的平板检测 | 第60-61页 |
| ·pMB260的构建 | 第61-62页 |
| 4 小结和讨论 | 第62-66页 |
| ·小结 | 第62-63页 |
| ·讨论 | 第63-66页 |
| 参考文献 | 第66-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 附录 | 第78-80页 |
