| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-30页 |
| ·微生物细胞表面展示技术研究进展 | 第11-17页 |
| ·微生物细胞表面展示技术简介 | 第11-12页 |
| ·微生物表面展示系统的种类 | 第12-15页 |
| ·革兰氏阳性细菌表面展示系统 | 第12页 |
| ·革兰氏阴性细菌表面展示系统 | 第12-14页 |
| ·酵母表面展示系统 | 第14-15页 |
| ·微生物表面展示技术的应用现状 | 第15-17页 |
| ·细胞表面展示存在的问题及展望 | 第17页 |
| ·运载蛋白-AcmA | 第17-21页 |
| ·肽聚糖锚定模体——LysM | 第17-19页 |
| ·乳酸乳球菌自溶素蛋白-AcmA概述 | 第19-20页 |
| ·AcmA蛋白作为运载蛋白的表面展示应用 | 第20-21页 |
| ·乘客蛋白Mn-SodA蛋白 | 第21-27页 |
| ·SOD概述 | 第21-22页 |
| ·SOD种类 | 第22-24页 |
| ·SOD的提取制备及纯化 | 第24-26页 |
| ·SOD的活性测定 | 第26页 |
| ·SOD蛋白研究应用现状 | 第26-27页 |
| ·表面展示宿主菌——乳酸乳球菌 | 第27-29页 |
| ·研究目的和意义 | 第29-30页 |
| 2 材料与方法 | 第30-42页 |
| ·实验材料 | 第30-35页 |
| ·质粒 | 第30-31页 |
| ·菌株 | 第31-32页 |
| ·培养基 | 第32-33页 |
| ·PCR反应的引物 | 第33-34页 |
| ·试剂和仪器 | 第34-35页 |
| ·质粒和总DNA提取、质粒转化时所用到的试剂 | 第34页 |
| ·酶切、酶连、PCR和DNA回收所需试剂 | 第34页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳和SDS-PAGE电泳所需试剂 | 第34-35页 |
| ·仪器 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-42页 |
| ·技术路线 | 第35-36页 |
| ·乳酸乳球菌分离鉴定 | 第36-38页 |
| ·抑菌活性菌株的分离 | 第36-37页 |
| ·分离菌株抑菌活性的测定 | 第37页 |
| ·分离菌株的形态观察与生理生化特征测定 | 第37页 |
| ·G+C mol%测定 | 第37页 |
| ·总DNA制备、PCR反应扩增16S rDNA与序列分析 | 第37-38页 |
| ·分离菌株acmA基因的PCR反应扩增与序列分析 | 第38页 |
| ·常规分子生物学操作 | 第38-39页 |
| ·大肠杆菌质粒的快速检测 | 第38页 |
| ·大肠杆菌质粒抽提 | 第38页 |
| ·酶连与大肠杆菌的CaCl_2法转化 | 第38-39页 |
| ·DNA电泳分析及回收 | 第39页 |
| ·乳酸乳球菌和大肠杆菌总DNA提取 | 第39页 |
| ·PCR扩增与DNA测序分析 | 第39-40页 |
| ·乳酸乳球菌感受态制备及电转化 | 第40页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第40-41页 |
| ·蛋白的样品制备 | 第40-41页 |
| ·SDS-PAGE凝胶的制备 | 第41页 |
| ·电泳、染色及脱色 | 第41页 |
| ·重组菌株SOD酶活测定 | 第41-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-57页 |
| ·乳酸乳球菌的分离与鉴定 | 第42-46页 |
| ·具抑菌活性菌株的初筛与活性比较测定 | 第42页 |
| ·分离菌株MB191的鉴定 | 第42-46页 |
| ·细菌形态与培养性状 | 第42-43页 |
| ·生理生化特性 | 第43-44页 |
| ·G+C mol%测定 | 第44页 |
| ·16S rDNA扩增、序列测定与聚类分析 | 第44-45页 |
| ·N-乙酰胞壁酸水解酶基因(acmA)的扩增与序列测定 | 第45-46页 |
| ·MB191的抑菌谱及其抑菌效果 | 第46-48页 |
| ·乳酸乳球菌表面展示载体的构建及Mn-SOD表达 | 第48-57页 |
| ·乳酸乳球表面展示载体的构建 | 第48-54页 |
| ·Mn-sod A基因PCR克隆及序列分析 | 第48-49页 |
| ·acmA与asc基因克隆与序列分析 | 第49-51页 |
| ·乳酸乳球菌重组质粒的构建 | 第51-54页 |
| ·Mn-SOD蛋白表达及酶活测定 | 第54-57页 |
| ·重组菌株鉴定 | 第54-55页 |
| ·重组菌株SDS-PAGE分析 | 第55-56页 |
| ·Mn-SOD酶活测定 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-60页 |
| ·乳酸乳球菌的分离鉴定 | 第57-58页 |
| ·利用AcmA及cA-domain在乳酸乳球菌表面展示Mn-SOD | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 附录 | 第74-75页 |
