磷脂酰丝氨酸合成酶基因异源表达及酶学性质研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 1 前言 | 第8-18页 |
| ·磷脂酰丝氨酸合成酶 | 第8-9页 |
| ·磷脂酰丝氨酸合成酶的催化性质 | 第8-9页 |
| ·磷脂酰丝氨酸合成酶催化反应机理 | 第9页 |
| ·磷脂酰丝氨酸合成酶的酶活检测方法 | 第9-12页 |
| ·水解活性的测定 | 第9-11页 |
| ·转酯活性的测定 | 第11-12页 |
| ·磷脂的相关特性 | 第12-15页 |
| ·磷脂的结构与分类 | 第12-13页 |
| ·磷脂的改性 | 第13-15页 |
| ·磷脂酰丝氨酸 | 第15-16页 |
| ·磷脂酰丝氨酸的分布 | 第15页 |
| ·磷脂酰丝氨酸的功能 | 第15-16页 |
| ·本课题研究意义与研究内容 | 第16-18页 |
| ·本课题研究意义 | 第16-17页 |
| ·本课题的研究内容 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-31页 |
| ·材料 | 第18-21页 |
| ·菌株与质粒 | 第18页 |
| ·试剂 | 第18-19页 |
| ·溶液 | 第19-20页 |
| ·培养基和抗生素 | 第20-21页 |
| ·仪器 | 第21页 |
| ·方法 | 第21-31页 |
| ·染色体DNA的提取 | 第21-22页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第22页 |
| ·基因克隆 | 第22-24页 |
| ·大肠杆菌转化实验 | 第24-25页 |
| ·枯草芽孢杆菌转化实验 | 第25-27页 |
| ·基因工程菌发酵条件的研究 | 第27-28页 |
| ·酶活力测定 | 第28页 |
| ·重组蛋白浓度测定 | 第28-29页 |
| ·酶的分离纯化与酶学性质研究 | 第29-31页 |
| 3 结果与讨论 | 第31-51页 |
| ·基因克隆 | 第31-39页 |
| ·大肠杆菌K_(12)染色体DNA的提取 | 第31页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第31-32页 |
| ·重组质粒的构建 | 第32-33页 |
| ·酶切验证和PCR验证 | 第33-34页 |
| ·磷脂酰丝氨酸合成酶基因序列分析 | 第34-38页 |
| ·重组枯草芽孢杆菌诱导表达及SDS-PAGE分析 | 第38页 |
| ·原始菌和重组菌磷脂酰丝氨酸合成酶的酶活分析 | 第38-39页 |
| ·基因工程菌发酵条件的研究 | 第39-43页 |
| ·重组菌生长曲线与产酶曲线 | 第39页 |
| ·pH对产酶的影响 | 第39-40页 |
| ·装液量对产酶的影响 | 第40页 |
| ·转速对产酶的影响 | 第40-41页 |
| ·诱导时菌体浓度对产酶的影响 | 第41页 |
| ·诱导剂量对产酶的影响 | 第41-42页 |
| ·诱导时间对产酶的影响 | 第42-43页 |
| ·诱导温度对产酶的影响 | 第43页 |
| ·酶的分离纯化 | 第43-46页 |
| ·硫酸铵盐析 | 第43-44页 |
| ·脱盐浓缩 | 第44页 |
| ·SP-Sepharose HP离子交换层析 | 第44-45页 |
| ·Sephadex G-75凝胶层析 | 第45页 |
| ·酶的纯化回收 | 第45-46页 |
| ·分子量测定 | 第46页 |
| ·酶学性质 | 第46-51页 |
| ·酶作用的最适温度及温度稳定性 | 第46-47页 |
| ·酶作用的最适pH和pH稳定性 | 第47-48页 |
| ·离子表面活性剂对PSS活性的影响 | 第48-51页 |
| 4 结论 | 第51-52页 |
| 5 展望 | 第52-53页 |
| 6 参考文献 | 第53-59页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第59-60页 |
| 8 致谢 | 第60页 |
