中温α-淀粉酶基因的异源表达及发酵条件的优化
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 1 前言 | 第10-21页 |
| ·淀粉酶概述 | 第10-14页 |
| ·淀粉酶的分类 | 第10页 |
| ·α-淀粉酶的性质 | 第10-12页 |
| ·α-淀粉酶的来源与生产 | 第12页 |
| ·α-淀粉酶蛋白质序列分析 | 第12页 |
| ·α-淀粉酶的立体构造 | 第12-13页 |
| ·α-淀粉酶的反应中心 | 第13-14页 |
| ·中温α-淀粉酶应用进展 | 第14-17页 |
| ·中温α-淀粉酶的应用 | 第14-16页 |
| ·中温α-淀粉酶的研究概况 | 第16-17页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达系统 | 第17-19页 |
| ·草芽孢杆菌表达系统的特点 | 第17-18页 |
| ·转基因方法 | 第18页 |
| ·芽孢杆菌常用的宿主和载体 | 第18-19页 |
| ·本论文的研究意义及内容 | 第19-21页 |
| ·研究意义 | 第19-20页 |
| ·研究内容 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-38页 |
| ·材料 | 第21-26页 |
| ·菌种及质粒 | 第21页 |
| ·主要药品 | 第21-22页 |
| ·工具酶及标准蛋白 | 第22-23页 |
| ·抗生素 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23-24页 |
| ·相关溶液 | 第24-26页 |
| ·培养基 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-38页 |
| ·培养条件 | 第26-27页 |
| ·菌体保存 | 第27页 |
| ·枯草芽孢杆菌中温α-淀粉酶活力测定方法 | 第27-28页 |
| ·枯草芽孢杆菌中质粒的提取 | 第28页 |
| ·枯草芽孢杆菌染色体DNA的提取 | 第28-29页 |
| ·DNA溶液中蛋白质及RNA的去除 | 第29页 |
| ·DNA沉淀与贮存 | 第29页 |
| ·DNA纯度和浓度的测定 | 第29-30页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR) | 第30-31页 |
| ·DNA的酶切 | 第31页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳及DNA片段浓度、大小测算 | 第31-32页 |
| ·DNA片段的回收 | 第32-33页 |
| ·DNA连接 | 第33页 |
| ·质粒DNA对大肠杆菌的转化 | 第33-34页 |
| ·质粒DNA对枯草芽孢杆菌的转化 | 第34页 |
| ·基因测序 | 第34-35页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第35-36页 |
| ·重组酶性质的研究 | 第36页 |
| ·菌体核酸量的测定 | 第36页 |
| ·总糖的测定方法 | 第36-37页 |
| ·正交试验设计及统计方法 | 第37-38页 |
| 3 结果与讨论 | 第38-67页 |
| ·出发菌株的生理及生产特性 | 第38-40页 |
| ·出发菌株的生理特性 | 第38页 |
| ·生长曲线的测定 | 第38页 |
| ·菌种产酶能力的测定 | 第38-39页 |
| ·酶作用最适温度的测定 | 第39-40页 |
| ·酶作用最适pH值的测定 | 第40页 |
| ·目的基因的制备 | 第40-42页 |
| ·质粒pET-22b的提取 | 第40-41页 |
| ·PCR扩增 | 第41-42页 |
| ·重组质粒pET-amy的构建及转化 | 第42-45页 |
| ·重组质粒pET-amy的构建 | 第42-43页 |
| ·转化大肠杆菌DH5α | 第43-44页 |
| ·重组子的筛选和鉴定 | 第44-45页 |
| ·目的基因的序列测定 | 第45-46页 |
| ·表达载体pWB-amy的构建 | 第46-49页 |
| ·载体pWB980的特性 | 第46页 |
| ·表达载体pWB-amy的构建 | 第46-47页 |
| ·表达载体pWB-amy转化大肠杆菌WB600 | 第47页 |
| ·重组子的筛选和鉴定 | 第47-49页 |
| ·AMY的表达 | 第49-50页 |
| ·AMY的酶活检测 | 第50页 |
| ·重组酶性质的研究 | 第50-52页 |
| ·酶的最适温度 | 第50-51页 |
| ·酶的最适pH | 第51-52页 |
| ·产酶培养基的优化 | 第52-57页 |
| ·不同碳源对产酶的影响 | 第52-53页 |
| ·碳源浓度对产酶的影响 | 第53页 |
| ·不同氮源对产酶的影响 | 第53-54页 |
| ·氮源浓度对产酶的影响 | 第54页 |
| ·不同金属盐对产酶的影响 | 第54-55页 |
| ·最佳产酶培养基的确定 | 第55-57页 |
| ·摇瓶产酶工艺参数的优化 | 第57-61页 |
| ·种子生长曲线的测定 | 第57-58页 |
| ·种龄对产酶的影响 | 第58页 |
| ·接种量对产酶的影响 | 第58-59页 |
| ·装液量对产酶的影响 | 第59页 |
| ·摇床转速对产酶的影响 | 第59-60页 |
| ·起始pH对产酶的影响 | 第60-61页 |
| ·摇瓶发酵过程曲线 | 第61页 |
| ·7L发酵罐产酶条件的研究 | 第61-66页 |
| ·发酵过程中溶氧浓度(D0值)的调控对产酶的影响 | 第61-63页 |
| ·发酵过程中pH值的变化及控制产酶的影响 | 第63页 |
| ·补料控制对产酶的影响 | 第63-65页 |
| ·7L发酵罐发酵过程曲线 | 第65-66页 |
| ·小结 | 第66-67页 |
| 4 结论 | 第67-68页 |
| 5 展望 | 第68-69页 |
| 6 参考文献 | 第69-75页 |
| 7 论文发表情况 | 第75页 |
| 8 申请专利 | 第75-76页 |
| 9 致谢 | 第76页 |
