| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 第1章 绪论 | 第15-35页 |
| ·有机介质中的生物催化 | 第15-18页 |
| ·脂肪酶概述 | 第18-22页 |
| ·脂肪酶来源 | 第18-19页 |
| ·脂肪酶的结构特征和催化机理 | 第19-20页 |
| ·脂肪酶的专一性 | 第20-22页 |
| ·细菌脂肪酶的发酵条件、纯化和生化特性 | 第22-26页 |
| ·细菌脂肪酶发酵条件 | 第22-24页 |
| ·细菌脂肪酶的纯化 | 第24页 |
| ·细菌脂肪酶的生化特性 | 第24-26页 |
| ·耐有机溶剂脂肪酶 | 第26-30页 |
| ·Pseudomonas aeruginosa LST-03脂肪酶 | 第26-28页 |
| ·Pseudomonas aeruginosa Pse脂肪酶 | 第28页 |
| ·Pseudomonas sp.S5脂肪酶 | 第28页 |
| ·Bacillus sphaericus 205y脂肪酶 | 第28-29页 |
| ·Serratia marcescens脂肪酶 | 第29页 |
| ·其他耐有机溶剂脂肪酶 | 第29-30页 |
| ·脂肪酶在有机介质中的应用 | 第30-31页 |
| ·芳香酯及其产生 | 第31-32页 |
| ·本研究的意义及主要研究内容 | 第32-35页 |
| ·本研究的意义 | 第32-34页 |
| ·主要研究内容 | 第34-35页 |
| 第2章 耐有机溶剂脂肪酶产生菌的筛选和菌种鉴定 | 第35-48页 |
| ·引言 | 第35页 |
| ·材料 | 第35-37页 |
| ·实验仪器与设备 | 第35-36页 |
| ·试剂 | 第36页 |
| ·实验材料 | 第36页 |
| ·培养基 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37-40页 |
| ·富集培养 | 第37页 |
| ·初筛 | 第37页 |
| ·复筛 | 第37页 |
| ·脂肪酶活性的测定方法 | 第37页 |
| ·标准曲线的制作 | 第37页 |
| ·菌株的形态特征鉴定 | 第37-40页 |
| ·菌株的生理生化特征鉴定 | 第40页 |
| ·菌株的16SrDNA分析 | 第40页 |
| ·粗酶液的有机溶剂耐受性 | 第40页 |
| ·结果与讨论 | 第40-46页 |
| ·耐有机溶剂脂肪酶产生菌的筛选 | 第40-42页 |
| ·菌株CS-2的形态特征和生理生化特征 | 第42-44页 |
| ·菌株CS-2的16SrDNA分析 | 第44-46页 |
| ·粗脂肪酶液的有机溶剂耐受性 | 第46页 |
| ·本章小结 | 第46-48页 |
| 第3章 Pseudomonas aeruginosa摇瓶发酵产脂肪酶条件的研究 | 第48-55页 |
| ·引言 | 第48页 |
| ·材料 | 第48-49页 |
| ·实验仪器与设备 | 第48-49页 |
| ·试剂 | 第49页 |
| ·实验材料 | 第49页 |
| ·培养基 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-50页 |
| ·脂肪酶活性测定 | 第49页 |
| ·菌体干重的测定 | 第49页 |
| ·菌种活化和发酵培养 | 第49页 |
| ·发酵时间对菌体生长和产脂肪酶的影响 | 第49页 |
| ·不同氮源对产脂肪酶的影响 | 第49页 |
| ·不同碳源对产脂肪酶的影响 | 第49-50页 |
| ·不同表面活性剂对产脂肪酶的影响 | 第50页 |
| ·不同温度对产脂肪酶的影响 | 第50页 |
| ·不同转速对产脂肪酶的影响 | 第50页 |
| ·不同初始pH值对产脂肪酶的影响 | 第50页 |
| ·结果与讨论 | 第50-53页 |
| ·发酵时间对菌体生长和产脂肪酶的影响 | 第50-51页 |
| ·氮源对产脂肪酶的影响 | 第51页 |
| ·碳源对产脂肪酶的影响 | 第51-52页 |
| ·表面活性剂对产脂肪酶的影响 | 第52页 |
| ·温度对产脂肪酶的影响 | 第52-53页 |
| ·转速对产脂肪酶的影响 | 第53页 |
| ·初始pH值对产脂肪酶的影响 | 第53页 |
| ·本章小结 | 第53-55页 |
| 第4章 CS-2脂肪酶的纯化和表征 | 第55-69页 |
| ·引言 | 第55页 |
| ·材料 | 第55-56页 |
| ·实验仪器与设备 | 第55-56页 |
| ·试剂 | 第56页 |
| ·实验材料 | 第56页 |
| ·培养基 | 第56页 |
| ·实验方法 | 第56-60页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第56页 |
| ·标准曲线的制作 | 第56-57页 |
| ·脂肪酶活性测定 | 第57页 |
| ·菌种活化和发酵培养 | 第57页 |
| ·不同孔径的超滤膜对CS-2脂肪酶纯化的影响 | 第57页 |
| ·不同饱和度的丙酮对CS-2脂肪酶纯化的影响 | 第57-58页 |
| ·CS-2脂肪酶的纯化 | 第58页 |
| ·CS-2脂肪酶的分子量测定 | 第58页 |
| ·CS-2脂肪酶的C端测序 | 第58-59页 |
| ·温度对CS-2脂肪酶活性的影响 | 第59页 |
| ·CS-2脂肪酶的热稳定性 | 第59页 |
| ·pH对CS-2脂肪酶活性的影响 | 第59页 |
| ·CS-2脂肪酶的pH稳定性 | 第59页 |
| ·金属离子对CS-2脂肪酶活性的影响 | 第59页 |
| ·表面活性剂对CS-2脂肪酶活性的影响 | 第59页 |
| ·CS-2脂肪酶的最适底物 | 第59页 |
| ·有机溶剂对脂肪酶活性的影响 | 第59页 |
| ·数据处理的统计学方法 | 第59-60页 |
| ·结果与讨论 | 第60-67页 |
| ·不同孔径的超滤膜对CS-2脂肪酶纯化的影响 | 第60页 |
| ·不同饱和度的丙酮对CS-2脂肪酶纯化的影响 | 第60页 |
| ·CS-2脂肪酶的纯化 | 第60-61页 |
| ·CS-2脂肪酶的分子量 | 第61-62页 |
| ·CS-2脂肪酶的C端序列 | 第62-63页 |
| ·温度对CS-2脂肪酶活性的影响 | 第63页 |
| ·CS-2脂肪酶的热稳定性 | 第63页 |
| ·pH对CS-2脂肪酶活性的影响 | 第63页 |
| ·CS-2脂肪酶的pH稳定性 | 第63-64页 |
| ·金属离子对CS-2脂肪酶活性的影响 | 第64页 |
| ·表面活性剂对CS-2脂肪酶活性的影响 | 第64-66页 |
| ·CS-2脂肪酶的最适底物 | 第66页 |
| ·有机溶剂对CS-2脂肪酶活性的影响 | 第66-67页 |
| ·本章小结 | 第67-69页 |
| 第5章 脂肪酶及其折叠酶基因的克隆和表达 | 第69-80页 |
| ·引言 | 第69页 |
| ·材料 | 第69-71页 |
| ·实验仪器和设备 | 第69-70页 |
| ·试剂 | 第70页 |
| ·实验材料 | 第70页 |
| ·培养基 | 第70-71页 |
| ·研究方法 | 第71-74页 |
| ·菌种活化和发酵培养 | 第71页 |
| ·细菌基因组的提取和分析 | 第71页 |
| ·E.coli XL10-gold和E.coli BL21(DE3)感受态细胞的制备 | 第71页 |
| ·CS-2脂肪酶及其折叠酶基因的克隆和测序 | 第71页 |
| ·CS-2脂肪酶及其折叠酶基因的共表达 | 第71-73页 |
| ·CS-2脂肪酶基因的单独克隆和表达 | 第73页 |
| ·重组CS-2脂肪酶其折叠酶的纯化 | 第73页 |
| ·脂肪酶活性测定方法 | 第73页 |
| ·SDS-PAGE检测表达蛋白 | 第73-74页 |
| ·序列分析 | 第74页 |
| ·结果与讨论 | 第74-79页 |
| ·CS-2脂肪酶及其折叠酶基因的克隆和测序 | 第74-76页 |
| ·CS-2脂肪酶及其折叠酶基因的共表达和酶的纯化 | 第76-78页 |
| ·CS-2脂肪酶基因的单独表达 | 第78-79页 |
| ·本章小结 | 第79-80页 |
| 第6章 固定化的重组CS-2脂肪酶在有机介质中催化合成乙酸丁酯的研究 | 第80-86页 |
| ·引言 | 第80页 |
| ·材料 | 第80-81页 |
| ·实验仪器与设备 | 第80-81页 |
| ·试剂 | 第81页 |
| ·实验材料 | 第81页 |
| ·培养基 | 第81页 |
| ·实验方法 | 第81-82页 |
| ·菌种活化和发酵培养 | 第81页 |
| ·脂肪酶的纯化 | 第81页 |
| ·脂肪酶的固定化 | 第81-82页 |
| ·乙酸丁酯的合成 | 第82页 |
| ·脂肪酶活性测定方法 | 第82页 |
| ·转化率的测定 | 第82页 |
| ·结果与讨论 | 第82-85页 |
| ·反应时间对乙酸丁酯合成的影响 | 第82页 |
| ·水分活度对乙酸丁酯合成的影响 | 第82-83页 |
| ·反应温度对乙酸丁酯合成的影响 | 第83页 |
| ·初始底物浓度对乙酸丁酯合成的影响 | 第83-84页 |
| ·反应过程中添加4A分子筛对乙酸丁酯合成的影响 | 第84-85页 |
| ·固定化酶重复使用对乙酸丁酯合成的影响 | 第85页 |
| ·本章小结 | 第85-86页 |
| 第7章 总结与展望 | 第86-88页 |
| ·总结 | 第86-87页 |
| ·展望 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 博士期间文章发表情况 | 第107页 |
