| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第1章 前言 | 第14-37页 |
| ·核苷化合物及其重要意义 | 第14-18页 |
| ·抗病毒核苷药物 | 第14-15页 |
| ·抗癌类核苷药物 | 第15-18页 |
| ·核苷类化合物的合成 | 第18-24页 |
| ·化学合成 | 第18-19页 |
| ·发酵法生产核苷 | 第19-20页 |
| ·酶法合成核苷 | 第20-24页 |
| ·核苷磷酸化酶 | 第20页 |
| ·N-脱氧核糖转移酶 | 第20-21页 |
| ·腺苷脱氨酶或腺苷酸脱氨酶 | 第21-24页 |
| ·核苷磷酸化酶及其性质 | 第24-31页 |
| ·嘌呤核苷磷酸化酶及其性质 | 第25-28页 |
| ·尿苷磷酸化酶及其性质 | 第28-29页 |
| ·胸苷磷酸化酶及其性质 | 第29-31页 |
| ·核苷磷酸化酶的克隆与表达 | 第31页 |
| ·核苷磷酸化酶的催化机制 | 第31-32页 |
| ·应用核苷磷酸化酶酶法合成核苷类化合物 | 第32-35页 |
| ·双酶反应平衡的建立 | 第32页 |
| ·副反应的防止 | 第32-33页 |
| ·半合成法 | 第33-34页 |
| ·非水相反应 | 第34页 |
| ·利用固定化酶或固定细胞连续反应 | 第34-35页 |
| ·核苷类化合物的酶法合成研究进展 | 第35页 |
| ·本课题的意义及研究内容 | 第35-37页 |
| 第2章 核苷磷酸化酶基因的克隆与表达 | 第37-50页 |
| ·材料与方法 | 第39-45页 |
| ·试剂与仪器 | 第39-42页 |
| ·方法 | 第42-45页 |
| ·结果与分析 | 第45-49页 |
| ·核苷磷酸化酶基因的体外扩增 | 第45-46页 |
| ·核苷磷酸化酶克隆载体的构建 | 第46-48页 |
| ·核苷磷酸化酶表达载体的构建 | 第48-49页 |
| ·结论 | 第49-50页 |
| 第3章 核苷磷酸化酶的诱导表达与活性分析 | 第50-62页 |
| ·材料和方法 | 第50-55页 |
| ·试剂与仪器 | 第50-53页 |
| ·方法 | 第53-55页 |
| ·结果与分析 | 第55-61页 |
| ·重组大肠杆菌生长曲线的测定 | 第55-56页 |
| ·核苷磷酸化酶的表达分析 | 第56-60页 |
| ·嘌呤核苷磷酸化酶的表达 | 第56-57页 |
| ·尿苷磷酸化酶的表达 | 第57-58页 |
| ·胸苷磷酸化酶的表达 | 第58页 |
| ·重组胸苷磷酸化酶诱导表达条件的优化 | 第58-60页 |
| ·重组核苷磷酸化酶活性的研究 | 第60-61页 |
| ·重组核苷磷酸化酶的活力测定 | 第60-61页 |
| ·重组菌与野生菌核苷磷酸化酶的活性比较 | 第61页 |
| ·结论 | 第61-62页 |
| 第4章 核苷磷酸化酶诱导表达条件的优化 | 第62-81页 |
| ·材料与方法 | 第62-63页 |
| ·试剂与仪器 | 第62页 |
| ·实验方法 | 第62-63页 |
| ·结果与讨论 | 第63-81页 |
| ·尿苷磷酸化酶诱导条件的优化 | 第63-70页 |
| ·诱导剂对菌体生长的影响 | 第63页 |
| ·破碎细胞与完整细胞中UPase活力的比较 | 第63-64页 |
| ·不同时间加入诱导剂对UPase活力的影响 | 第64-65页 |
| ·不同浓度的诱导剂对UPase活力的影响 | 第65页 |
| ·不同的诱导时间对UPase活力的影响 | 第65-68页 |
| ·温度对UPase活力的影响 | 第68页 |
| ·UPase的热稳定性 | 第68-69页 |
| ·E.coli BL21(DE3)(pET-11a-udp)中质粒的稳定性 | 第69-70页 |
| ·小结 | 第70页 |
| ·胸苷磷酸化酶诱导条件的优化 | 第70-75页 |
| ·诱导剂对菌体生长的影响 | 第70-71页 |
| ·破碎细胞与完整细胞中TPase活力的比较 | 第71页 |
| ·诱导剂的加入时间对TPase活力的影响 | 第71-72页 |
| ·不同浓度的乳糖对TPase活力的影响 | 第72-73页 |
| ·不同的诱导时间对TPase的影响 | 第73-74页 |
| ·温度对TPase活力的影响 | 第74页 |
| ·质粒的稳定性 | 第74页 |
| ·TPase的热稳定性 | 第74-75页 |
| ·小结 | 第75页 |
| ·嘌呤核苷磷酸化酶诱导条件的优化 | 第75-81页 |
| ·诱导剂对菌体生长的影响 | 第75页 |
| ·破碎细胞与完整细胞中PNPase活力的比较 | 第75-76页 |
| ·不同时间加入乳糖对PNPase活力的影响 | 第76-77页 |
| ·不同浓度的诱导剂对PNPase的影响 | 第77-78页 |
| ·不同的诱导时间对PNPase的影响 | 第78页 |
| ·温度对PNPase活力的影响 | 第78-79页 |
| ·PNPase的热稳定性 | 第79-80页 |
| ·PNPase质粒的稳定性 | 第80页 |
| ·小结 | 第80-81页 |
| 第5章 核苷磷酸化酶基因的共表达研究 | 第81-93页 |
| ·材料与方法 | 第82-85页 |
| ·试剂与仪器 | 第82-84页 |
| ·实验方法 | 第84-85页 |
| ·结果与讨论 | 第85-93页 |
| ·共表达重组菌株的构建 | 第85-90页 |
| ·双质粒重组菌株的构建 | 第85-87页 |
| ·串联重组菌株的构建 | 第87-89页 |
| ·重组质粒稳定性 | 第89-90页 |
| ·小结 | 第90页 |
| ·共表达菌中核苷磷酸化酶的诱导表达与活性分析 | 第90-93页 |
| ·重组共表达菌株核苷磷酸化酶的表达 | 第90-92页 |
| ·重组菌株酶活的测定 | 第92页 |
| ·小结 | 第92-93页 |
| 第6章 应用重组核苷磷酸化酶酶法合成核苷 | 第93-110页 |
| ·材料与方法 | 第93-94页 |
| ·试剂与仪器 | 第93-94页 |
| ·实验方法 | 第94页 |
| ·结果与分析 | 第94-110页 |
| ·嘌呤核苷磷酸化酶对核苷的转化 | 第94-97页 |
| ·反应时间 | 第94-95页 |
| ·温度 | 第95页 |
| ·pH值 | 第95页 |
| ·菌体量 | 第95-96页 |
| ·嘌呤核苷磷酸化酶对其它核苷的转化 | 第96-97页 |
| ·尿苷磷酸化酶对核苷的转化 | 第97-100页 |
| ·反应时间 | 第97-98页 |
| ·温度 | 第98页 |
| ·pH | 第98-99页 |
| ·菌体量 | 第99页 |
| ·尿苷磷酸化酶对其它核苷的转化 | 第99-100页 |
| ·胸苷磷酸化酶对核苷的转化 | 第100-103页 |
| ·反应时间 | 第100-101页 |
| ·温度 | 第101页 |
| ·pH | 第101-102页 |
| ·菌体量 | 第102页 |
| ·胸苷磷酸化酶对其它核苷的转化 | 第102-103页 |
| ·小结 | 第103页 |
| ·双酶反应 | 第103-110页 |
| ·三种重组核苷磷酸化酶催化合成三氮唑核苷或三氮唑脱氧核苷的能力 | 第104页 |
| ·温度对三氮唑核苷或三氮唑脱氧核苷合成的影响 | 第104-105页 |
| ·反应时间对三氮唑核苷或三氮唑脱氧核苷合成的影响 | 第105-106页 |
| ·湿菌体量对三氮唑核苷或三氮唑脱氧核苷合成的影响 | 第106页 |
| ·pH对三氮唑核苷或三氮唑脱氧核苷合成的影响 | 第106-107页 |
| ·缓冲液对三氮唑核苷或三氮唑脱氧核苷合成的影响 | 第107-108页 |
| ·应用BL21(DE3)-pET-11a-deoA(+deoD)合成其它核苷 | 第108页 |
| ·应用BL21(DE3)-pET-11a-udp(+deoD)合成其它核苷 | 第108-109页 |
| ·小结 | 第109-110页 |
| 第7章 共表达重组菌转化核苷的研究 | 第110-116页 |
| ·材料与方法 | 第110页 |
| ·试剂与仪器 | 第110页 |
| ·方法 | 第110页 |
| ·结果与讨论 | 第110-115页 |
| ·底物浓度对转化率的影响 | 第110-111页 |
| ·菌体量对转化率的影响 | 第111-112页 |
| ·反应时间对转化率的影响 | 第112页 |
| ·pH对转化率的影响 | 第112-113页 |
| ·温度对转化率的影响 | 第113-114页 |
| ·TDU和DUD转化其它核苷 | 第114页 |
| ·TDA和DAD转化其它核苷 | 第114-115页 |
| ·小结 | 第115-116页 |
| 第8章 结论和展望 | 第116-119页 |
| ·结论 | 第116-118页 |
| ·展望 | 第118-119页 |
| 参考文献 | 第119-128页 |
| 博士期间发表论文 | 第128-129页 |
| 致谢 | 第129页 |
