| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-34页 |
| 1.1 乳腺及其发育调控 | 第10-13页 |
| 1.1.1 乳腺的发育 | 第10-12页 |
| 1.1.2 乳腺发育的激素调控 | 第12-13页 |
| 1.2 乳腺干细胞 | 第13-21页 |
| 1.2.1 干细胞及其表面标记分子 | 第13-20页 |
| 1.2.2 乳腺干细胞 | 第20-21页 |
| 1.3 乳腺癌干细胞 | 第21-28页 |
| 1.3.1 乳腺癌 | 第21-23页 |
| 1.3.2 乳腺癌干细胞 | 第23-26页 |
| 1.3.3 乳腺癌Lgr5 阳性细胞 | 第26-28页 |
| 1.4 干细胞体外3D培养研究 | 第28-31页 |
| 1.4.1 干细胞的体外3D培养技术 | 第28-29页 |
| 1.4.2 成体干细胞的体外3D培养 | 第29-30页 |
| 1.4.3 肿瘤干细胞的培养及生物标本库的建立 | 第30-31页 |
| 1.5 本论文的立题依据 | 第31-34页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第34-48页 |
| 2.1 实验小鼠及繁育 | 第34页 |
| 2.2 含有报告基因LacZ的自发型小鼠乳腺癌模型的建立 | 第34-35页 |
| 2.3 小鼠乳腺组织的固定与包埋 | 第35页 |
| 2.4 H&E染色 | 第35-36页 |
| 2.5 Whole-lacz染色β-半乳糖苷酶染色 | 第36页 |
| 2.6 核固红(Fast red)染色 | 第36页 |
| 2.7 RNA原位杂交(in situ hybridization,ISH) | 第36-37页 |
| 2.8 免疫组织化学染色(immunohistochemistry,IHC)(ABC法) | 第37-38页 |
| 2.9 免疫荧光染色(immunofluorescence,IF) | 第38-39页 |
| 2.10 Wnt3a及 R-spondin1 条件培养基的制备 | 第39-40页 |
| 2.11 小鼠乳腺上皮细胞的获得 | 第40页 |
| 2.12 FACS-GAL染色 | 第40-41页 |
| 2.13 体外组织类似物形成实验(in vitro organoid formation assay) | 第41页 |
| 2.14 小鼠乳腺癌组织类似物的固定包埋与切片 | 第41-42页 |
| 2.15 小鼠乳腺癌组织的剥离,固定及X-gal染色 | 第42页 |
| 2.16 自发型小鼠乳腺癌的接种与传代 | 第42-43页 |
| 2.17 肿瘤组织类似物(Tumor organoids)的培养 | 第43页 |
| 2.18 细胞迁移实验(Transwell) | 第43-44页 |
| 2.19 细胞侵袭实验(Transwell) | 第44页 |
| 2.20 小鼠乳腺癌肺转移模型的建立——尾静脉注射法 | 第44页 |
| 2.21 小鼠乳腺癌的远端转移 | 第44-45页 |
| 2.22 小鼠乳腺癌的放射性处理 | 第45页 |
| 2.23 小鼠乳腺癌细胞的放射敏感性研究 | 第45页 |
| 2.24 组织及细胞中mRNA的提取 | 第45-46页 |
| 2.25 cDNA的合成及实时荧光定量PCR | 第46-47页 |
| 2.26 数据统计处理 | 第47-48页 |
| 第三章 Lgr5 阳性乳腺上皮细胞的自我更新与分化能力研究 | 第48-76页 |
| 3.1 模式小鼠的选择及乳腺Lgr5 阳性细胞的鉴定分离 | 第49-55页 |
| 3.1.1 Lgr5-EGFP-IRES-creERT2和Lgr5-lacZ转基因小鼠的比较 | 第49-54页 |
| 3.1.2 Lgr5-lacZ小鼠中的Lgr5 阳性细胞为基底细胞亚群 | 第54-55页 |
| 3.2 Lgr5 阳性细胞在体外培养体系中能更高效地形成组织类似物 | 第55-61页 |
| 3.3 Lgr5 阳性细胞具有自我更新和分化能力 | 第61-65页 |
| 3.4 Lgr5 在小鼠乳腺中呈递减分布 | 第65-67页 |
| 3.5 Lgr5 在不同发育期乳腺中的表达及体外激素反应能力 | 第67-73页 |
| 3.5.1 Lgr5 阳性细胞在不同发育时期的小鼠乳腺中的分布情况 | 第67-68页 |
| 3.5.2 Lgr5 阳性细胞在怀孕期小鼠乳腺中的分布情况 | 第68-70页 |
| 3.5.3 Lgr5 阳性细胞产生的组织类似物对生殖激素具有反应性 | 第70-73页 |
| 3.6 小结 | 第73-76页 |
| 第四章 Lgr5 阳性乳腺癌细胞在乳腺癌形成与转移中的作用 | 第76-100页 |
| 4.1 MMTV-PyMT肿瘤中Lgr5 阳性细胞的致瘤性研究 | 第76-86页 |
| 4.1.1 MMTV-PyMT肿瘤Lgr5 表达与分布情况 | 第77-81页 |
| 4.1.2 MMTV-PyMT肿瘤的Lgr5 阳性细胞并无较强的形成肿瘤的能力 | 第81-86页 |
| 4.2 Lgr5 阳性细胞在小鼠乳腺癌转移中的作用 | 第86-94页 |
| 4.3 Lgr5 阳性细胞对放疗具有更强的抗性 | 第94-98页 |
| 4.4 小结 | 第98-100页 |
| 第五章 全文总结 | 第100-102页 |
| 5.1 主要结论 | 第100-101页 |
| 5.2 研究展望 | 第101-102页 |
| 附录一 缩略语 | 第102-104页 |
| 参考文献 | 第104-112页 |
| 攻读博士学位期间已发表或录用的论文 | 第112-113页 |
| 攻读博士学位期间参与的科研项目 | 第113-114页 |
| 攻读博士学位期间参加的国际国内会议 | 第114-115页 |
| 致谢 | 第115-117页 |
