| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5页 |
| 1 前言 | 第11-25页 |
| 1.1 尿苷简介 | 第11-12页 |
| 1.1.1 尿苷的理化性质 | 第11页 |
| 1.1.2 尿苷的用途 | 第11-12页 |
| 1.2 尿苷的生产方法 | 第12-13页 |
| 1.2.1 RNA水解法 | 第12页 |
| 1.2.2 化学合成法 | 第12页 |
| 1.2.3 微生物发酵法 | 第12-13页 |
| 1.3 嘧啶核苷的生物合成途径和代谢调控机制 | 第13-19页 |
| 1.3.1 尿苷产生菌 | 第13页 |
| 1.3.2 嘧啶核苷的从头合成途径 | 第13-14页 |
| 1.3.3 嘧啶核苷的补救合成途径 | 第14-15页 |
| 1.3.4 嘧啶核苷代谢调控机制 | 第15-16页 |
| 1.3.5 尿嘧啶的合成 | 第16页 |
| 1.3.6 前体物氨甲酰磷酸的合成及变构调节 | 第16-17页 |
| 1.3.7 前体物天冬氨酸的合成 | 第17-18页 |
| 1.3.8 前体物5-磷酸核糖-1-焦磷酸(PRPP)的合成 | 第18-19页 |
| 1.4 尿苷生产菌的育种策略及育种实例 | 第19-22页 |
| 1.4.1 尿苷生产菌的育种策略 | 第19-20页 |
| 1.4.2 尿苷菌种的选育实例 | 第20-22页 |
| 1.5 代谢工程 | 第22-23页 |
| 1.6 立题背景及研究内容 | 第23-25页 |
| 1.6.1 立题背景 | 第23页 |
| 1.6.2 本论文的主要研究内容 | 第23-24页 |
| 1.6.3 本论文的技术路线 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-32页 |
| 2.1.1 菌株 | 第25页 |
| 2.1.2 质粒 | 第25页 |
| 2.1.3 引物 | 第25-28页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第28-29页 |
| 2.1.5 主要试剂 | 第29-31页 |
| 2.1.6 主要溶液 | 第31页 |
| 2.1.7 抗生素 | 第31页 |
| 2.1.8 主要培养基 | 第31-32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-40页 |
| 2.2.1 质粒的小剂量提取 | 第32页 |
| 2.2.2 DNA的纯化回收 | 第32页 |
| 2.2.3 大肠杆菌/枯草芽孢杆菌基因组提取 | 第32-33页 |
| 2.2.4 大肠杆菌化学转化法感受态制备及转化实验 | 第33-34页 |
| 2.2.5 大肠杆菌电转化法感受态制备及转化实验 | 第34页 |
| 2.2.6 PCR扩增 | 第34-36页 |
| 2.2.7 琼脂糖凝胶电泳 | 第36页 |
| 2.2.8 质粒构建 | 第36-37页 |
| 2.2.9 gRNA质粒构建 | 第37-38页 |
| 2.2.10 CRISPR/Cas9基因整合方法 | 第38页 |
| 2.2.11 发酵液中尿苷浓度检测 | 第38-39页 |
| 2.2.12 尿苷工程菌的培养条件 | 第39-40页 |
| 3 结果与讨论 | 第40-64页 |
| 3.1 大肠杆菌尿苷合成途径重构 | 第40-46页 |
| 3.1.1 嘧啶核苷操纵子整合 | 第41-45页 |
| 3.1.2 UR1菌株的摇瓶发酵结果 | 第45-46页 |
| 3.2 阻断尿苷降解 | 第46-54页 |
| 3.2.1 udk基因的敲除 | 第47-48页 |
| 3.2.2 udp基因的敲除 | 第48-50页 |
| 3.2.3 rihA/B/C基因的敲除 | 第50-53页 |
| 3.2.4 五株菌的摇瓶发酵结果 | 第53-54页 |
| 3.3 提高尿苷前体物的供应 | 第54-64页 |
| 3.3.1 pyrAA/AB基因过表达菌株构建 | 第55-57页 |
| 3.3.2 thrA基因的敲除的构建 | 第57-59页 |
| 3.3.3 prsA基因的过表达的构建 | 第59-61页 |
| 3.3.4 UR3、UR4和UR5的摇瓶发酵结果 | 第61-62页 |
| 3.3.5 L发酵罐培养 | 第62-64页 |
| 4 结论 | 第64-66页 |
| 4.1 全文总结 | 第64页 |
| 4.2 论文的创新点 | 第64页 |
| 4.3 论文的不足之处 | 第64-66页 |
| 5 展望 | 第66-67页 |
| 6 参考文献 | 第67-74页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第74-75页 |
| 8 致谢 | 第75页 |