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代谢工程改造大肠杆菌制备尿苷

摘要第4-5页
abstract第5页
1 前言第11-25页
    1.1 尿苷简介第11-12页
        1.1.1 尿苷的理化性质第11页
        1.1.2 尿苷的用途第11-12页
    1.2 尿苷的生产方法第12-13页
        1.2.1 RNA水解法第12页
        1.2.2 化学合成法第12页
        1.2.3 微生物发酵法第12-13页
    1.3 嘧啶核苷的生物合成途径和代谢调控机制第13-19页
        1.3.1 尿苷产生菌第13页
        1.3.2 嘧啶核苷的从头合成途径第13-14页
        1.3.3 嘧啶核苷的补救合成途径第14-15页
        1.3.4 嘧啶核苷代谢调控机制第15-16页
        1.3.5 尿嘧啶的合成第16页
        1.3.6 前体物氨甲酰磷酸的合成及变构调节第16-17页
        1.3.7 前体物天冬氨酸的合成第17-18页
        1.3.8 前体物5-磷酸核糖-1-焦磷酸(PRPP)的合成第18-19页
    1.4 尿苷生产菌的育种策略及育种实例第19-22页
        1.4.1 尿苷生产菌的育种策略第19-20页
        1.4.2 尿苷菌种的选育实例第20-22页
    1.5 代谢工程第22-23页
    1.6 立题背景及研究内容第23-25页
        1.6.1 立题背景第23页
        1.6.2 本论文的主要研究内容第23-24页
        1.6.3 本论文的技术路线第24-25页
2 材料与方法第25-40页
    2.1 实验材料第25-32页
        2.1.1 菌株第25页
        2.1.2 质粒第25页
        2.1.3 引物第25-28页
        2.1.4 主要仪器第28-29页
        2.1.5 主要试剂第29-31页
        2.1.6 主要溶液第31页
        2.1.7 抗生素第31页
        2.1.8 主要培养基第31-32页
    2.2 实验方法第32-40页
        2.2.1 质粒的小剂量提取第32页
        2.2.2 DNA的纯化回收第32页
        2.2.3 大肠杆菌/枯草芽孢杆菌基因组提取第32-33页
        2.2.4 大肠杆菌化学转化法感受态制备及转化实验第33-34页
        2.2.5 大肠杆菌电转化法感受态制备及转化实验第34页
        2.2.6 PCR扩增第34-36页
        2.2.7 琼脂糖凝胶电泳第36页
        2.2.8 质粒构建第36-37页
        2.2.9 gRNA质粒构建第37-38页
        2.2.10 CRISPR/Cas9基因整合方法第38页
        2.2.11 发酵液中尿苷浓度检测第38-39页
        2.2.12 尿苷工程菌的培养条件第39-40页
3 结果与讨论第40-64页
    3.1 大肠杆菌尿苷合成途径重构第40-46页
        3.1.1 嘧啶核苷操纵子整合第41-45页
        3.1.2 UR1菌株的摇瓶发酵结果第45-46页
    3.2 阻断尿苷降解第46-54页
        3.2.1 udk基因的敲除第47-48页
        3.2.2 udp基因的敲除第48-50页
        3.2.3 rihA/B/C基因的敲除第50-53页
        3.2.4 五株菌的摇瓶发酵结果第53-54页
    3.3 提高尿苷前体物的供应第54-64页
        3.3.1 pyrAA/AB基因过表达菌株构建第55-57页
        3.3.2 thrA基因的敲除的构建第57-59页
        3.3.3 prsA基因的过表达的构建第59-61页
        3.3.4 UR3、UR4和UR5的摇瓶发酵结果第61-62页
        3.3.5 L发酵罐培养第62-64页
4 结论第64-66页
    4.1 全文总结第64页
    4.2 论文的创新点第64页
    4.3 论文的不足之处第64-66页
5 展望第66-67页
6 参考文献第67-74页
7 攻读硕士学位期间发表论文情况第74-75页
8 致谢第75页

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