| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-24页 |
| 1.1 β-1,4-半乳糖基转移酶 | 第10-15页 |
| 1.1.1 β-1,4-半乳糖基转移酶基因家族的发现 | 第10-11页 |
| 1.1.2 β-1,4-半乳糖基转移酶的特性 | 第11-12页 |
| 1.1.3 β-1,4-半乳糖基转移酶的功能 | 第12-15页 |
| 1.2 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)简介 | 第15-18页 |
| 1.2.1 PRRS流行病学简介 | 第15-16页 |
| 1.2.2 病原学简介 | 第16-18页 |
| 1.3 糖基化与病毒感染 | 第18-21页 |
| 1.3.1 蛋白糖基化对病毒的影响 | 第20-21页 |
| 1.3.2 病毒感染细胞后蛋白的糖基化及其功能变化 | 第21页 |
| 1.4 糖基化修饰在PRRSV致病与免疫机制中具有重要作用 | 第21-22页 |
| 1.5 本课题的研究意义 | 第22-24页 |
| 第2章 猪源抗病毒基因(pB4GALT5)筛选及鉴定 | 第24-34页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 实验材料 | 第24-25页 |
| 2.2.1 细胞与病毒 | 第24-25页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第25页 |
| 2.3 实验方法 | 第25-29页 |
| 2.3.1 3D4/21细胞培养 | 第25-26页 |
| 2.3.2 转录组测序 | 第26-27页 |
| 2.3.3 荧光定量PCR鉴定基因转录水平变化 | 第27-29页 |
| 2.3.4 流式细胞术鉴定基因蛋白水平变化 | 第29页 |
| 2.4 实验结果 | 第29-32页 |
| 2.4.1 转录组测序数据分析 | 第29-31页 |
| 2.4.2 pB4GALT5转录水平变化鉴定 | 第31页 |
| 2.4.3 pB4GALT5蛋白水平变化鉴定 | 第31-32页 |
| 2.5 分析与讨论 | 第32-33页 |
| 2.5.1 PRRSV感染引起宿主基因差异表达 | 第32-33页 |
| 2.5.2 PRRSV感染影响pB4GALT5胞内表达 | 第33页 |
| 2.6 本章小结 | 第33-34页 |
| 第3章 猪源抗病毒基因(pB4GALT5)克隆及表达 | 第34-60页 |
| 3.1 引言 | 第34-35页 |
| 3.2 实验材料 | 第35-38页 |
| 3.2.1 实验动物、细胞、载体、菌株 | 第35页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第35-38页 |
| 3.3 实验方法 | 第38-48页 |
| 3.3.1 细胞复苏与培养 | 第38页 |
| 3.3.2 Total RNA提取及去基因组DNA反转录 | 第38-39页 |
| 3.3.3 基因克隆 | 第39-41页 |
| 3.3.4 猪B4GALT5胞外蛋白表达 | 第41-44页 |
| 3.3.5 鼠抗猪B4GALT5 多克隆抗体制备 | 第44-45页 |
| 3.3.6 猪B4GALT5亚细胞定位分析 | 第45-48页 |
| 3.4 实验结果 | 第48-56页 |
| 3.4.1 猪B4GALT5基因的克隆与序列分析 | 第48-53页 |
| 3.4.2 GST-pB4GALT5蛋白表达及抗体制备 | 第53-56页 |
| 3.4.3 猪B4GALT5亚细胞定位分析 | 第56页 |
| 3.5 分析与讨论 | 第56-59页 |
| 3.5.1 猪B4GALT家族成员的特征和潜在功能 | 第56-57页 |
| 3.5.2 猪B4GALT5可催化半乳糖基转移反应 | 第57-58页 |
| 3.5.3 鼠抗猪B4GALT5抗体的特异性评价 | 第58-59页 |
| 3.6 本章小结 | 第59-60页 |
| 第4章 猪B4GALT5对PRRSV增殖的影响 | 第60-76页 |
| 4.1 引言 | 第60-61页 |
| 4.2 实验材料 | 第61-63页 |
| 4.2.1 细胞、载体、菌株、病毒 | 第61页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第61-63页 |
| 4.3 实验方法 | 第63-69页 |
| 4.3.1 真核表达载体构建 | 第63-65页 |
| 4.3.2 细胞复苏与培养 | 第65页 |
| 4.3.3 转染及接毒 | 第65页 |
| 4.3.4 Total RNA提取及反转录 | 第65页 |
| 4.3.5 相对荧光定量PCR | 第65-67页 |
| 4.3.6 Western blot | 第67页 |
| 4.3.7 病毒滴度(TCID50)鉴定 | 第67页 |
| 4.3.8 siRNA干扰 | 第67-68页 |
| 4.3.9 免疫共沉淀(Co-IP) | 第68页 |
| 4.3.10 免疫荧光 | 第68-69页 |
| 4.4 实验结果 | 第69-73页 |
| 4.4.1 过表达B4GALT5抑制PRRSV增殖 | 第69-70页 |
| 4.4.2 干扰B4GALT5表达可促进PRRSV增殖 | 第70页 |
| 4.4.3 B4GALT5与GP5存在互作 | 第70-73页 |
| 4.5 分析与讨论 | 第73-75页 |
| 4.5.1 猪B4GALT5调节PRRSV的增殖 | 第73-74页 |
| 4.5.2 猪B4GALT5参与GP5的糖基化修饰 | 第74-75页 |
| 4.6 本章小结 | 第75-76页 |
| 第5章 猪B4GALT5对免疫分子的影响 | 第76-88页 |
| 5.1 引言 | 第76-77页 |
| 5.2 实验材料 | 第77-78页 |
| 5.2.1 细胞与病毒 | 第77页 |
| 5.2.2 主要试剂 | 第77-78页 |
| 5.3 实验方法 | 第78-80页 |
| 5.3.1 细胞复苏与培养 | 第78页 |
| 5.3.2 转染及接毒 | 第78页 |
| 5.3.3 Total RNA提取及反转录 | 第78页 |
| 5.3.4 相对荧光定量PCR | 第78页 |
| 5.3.5 Western blot | 第78-79页 |
| 5.3.6 siRNA干扰 | 第79页 |
| 5.3.7 流式细胞术 | 第79-80页 |
| 5.4 实验结果 | 第80-85页 |
| 5.4.1 过表达B4GALT5促进免疫分子表达 | 第80-83页 |
| 5.4.2 干扰B4GALT5表达可抑制免疫分子表达 | 第83-85页 |
| 5.5 分析与讨论 | 第85-87页 |
| 5.5.1 猪B4GALT5 可加强炎症反应 | 第85-86页 |
| 5.5.2 猪B4GALT5可提高细胞抗原提呈能力 | 第86-87页 |
| 5.6 本章小结 | 第87-88页 |
| 结论与展望 | 第88-90页 |
| 本文创新之处 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-102页 |
| 附录 | 第102-104页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第104-106页 |
| 致谢 | 第106页 |
