| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 缩略词表 | 第7-11页 |
| 第一章 研究背景和文献综述 | 第11-31页 |
| 1.1 真核生物DNA复制起始概述 | 第11-18页 |
| 1.1.1 DNA复制原点 | 第12-13页 |
| 1.1.2 预复制复合物pre-RC的组分 | 第13-18页 |
| 1.2 解旋酶MCM的激活 | 第18-22页 |
| 1.2.1 DDK激酶(Dbf4-dependent Kinase) | 第18-20页 |
| 1.2.2 S-CDK(S phase Cyclin-dependent Kinase) | 第20-21页 |
| 1.2.3 Sld3在DNA复制起始中的作用 | 第21-22页 |
| 1.3 DNA复制时序调控概述 | 第22-30页 |
| 1.3.1 染色质结构对复制时序的影响 | 第23-25页 |
| 1.3.2 着丝粒对于复制时序的影响 | 第25-26页 |
| 1.3.3 DNA复制限量因子对复制时序的影响 | 第26页 |
| 1.3.4 全局性调控因子Fkh1/Fkh2在DNA复制时序调控中的作用 | 第26-30页 |
| 1.4 本课题研究意义 | 第30-31页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第31-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第31-37页 |
| 2.1.1 菌株 | 第31页 |
| 2.1.2 质粒 | 第31页 |
| 2.1.3 引物 | 第31页 |
| 2.1.4 实验试剂 | 第31-36页 |
| 2.1.5 实验仪器 | 第36-37页 |
| 2.2 实验方法 | 第37-43页 |
| 2.2.1 重组克隆构建 | 第37页 |
| 2.2.2 快速定点突变 | 第37页 |
| 2.2.3 酵母的高效转化 | 第37-38页 |
| 2.2.4 酵母基因操作 | 第38页 |
| 2.2.5 酵母基因组的提取 | 第38-39页 |
| 2.2.6 免疫印迹 | 第39页 |
| 2.2.7 流式细胞术 | 第39-40页 |
| 2.2.8 酵母双杂交 | 第40页 |
| 2.2.9 亲和层析纯化蛋白 | 第40页 |
| 2.2.10 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP) | 第40页 |
| 2.2.11 染色质免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP) | 第40-42页 |
| 2.2.12 体外原点结合实验 | 第42页 |
| 2.2.13 细胞复制原点复制起始分析 | 第42-43页 |
| 第三章 实验结果和讨论 | 第43-65页 |
| 3.1 酿酒酵母DDK参与DNA复制时序调控的机制 | 第43-55页 |
| 3.1.1 酵母双杂交筛选与Dbf4互作的因子 | 第43-45页 |
| 3.1.2 Dbf4与Fkh1的互作区域分析 | 第45-46页 |
| 3.1.3 Fkh1和Fkh2促进Dbf4在早期复制原点的招募 | 第46-49页 |
| 3.1.4 Dbf4主要通过C端参与DNA复制时序调控 | 第49-51页 |
| 3.1.5 Dbf4与Fkh1的相互作用参与维持DNA复制的正常时序 | 第51-53页 |
| 3.1.6 Fkh1和Fkh2有助于维持基因组稳定性 | 第53-55页 |
| 3.2 酿酒酵母DDK激酶参与Sld3招募的分子机制 | 第55-65页 |
| 3.2.1 酵母双杂交分析Sld3与MCM复合体各亚基的互作情况 | 第55-56页 |
| 3.2.2 Sld3与Mcm6的互作区域分析 | 第56-57页 |
| 3.2.3 Mcm6的N端对于维持细胞生长和DNA正常复制至关重要 | 第57-58页 |
| 3.2.4 Mcm6 N端的缺失导致Sld3无法招募和CMG无法成功组装 | 第58-59页 |
| 3.2.5 Sld3参与MCM互作的关键位点鉴别 | 第59-60页 |
| 3.2.6 Mcm2的N端对于维持细胞生长和DNA正常复制至关重要 | 第60-62页 |
| 3.2.7 DDK激酶促进Sld3与MCM复合体的互作 | 第62-65页 |
| 第四章 总结与展望 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 附录 | 第75-81页 |
| 附录1 菌株列表 | 第75-77页 |
| 附录2 质粒列表 | 第77-79页 |
| 附录3 引物列表 | 第79-81页 |
| 个人简历 | 第81页 |
