| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 1 引言 白粉菌与橡胶树互作及相关研究进展 | 第13-28页 |
| 1.1 橡胶树白粉病的发生和危害 | 第13-15页 |
| 1.1.1 橡胶树白粉病的危害 | 第13-14页 |
| 1.1.2 危害症状 | 第14页 |
| 1.1.3 橡胶白粉菌的生物学特性 | 第14页 |
| 1.1.4 橡胶白粉菌的防治 | 第14-15页 |
| 1.2 植物抗白粉病基因的研究 | 第15-18页 |
| 1.2.1 小麦抗白粉病基因 | 第15-16页 |
| 1.2.2 大麦抗白粉病基因 | 第16-17页 |
| 1.2.3 葡萄抗白粉病基因 | 第17页 |
| 1.2.4 甜瓜抗白粉病基因 | 第17-18页 |
| 1.2.5 橡胶树抗白粉病基因 | 第18页 |
| 1.3 分离克隆差显表达基因研究技术 | 第18-23页 |
| 1.3.1 基因差显技术及原理 | 第19-22页 |
| 1.3.2 基因差显技术在橡胶树中应用 | 第22-23页 |
| 1.4 橡胶树转化体系 | 第23-26页 |
| 1.4.1 橡胶树组织培养技术 | 第23-24页 |
| 1.4.2 橡胶树遗传转化体系 | 第24-26页 |
| 1.5 本研究目的及意义 | 第26-27页 |
| 1.6 技术路线 | 第27-28页 |
| 2 实验材料与方法 | 第28-54页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-31页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第28页 |
| 2.1.2 病原菌材料 | 第28页 |
| 2.1.3 菌种材料 | 第28页 |
| 2.1.4 化学试剂和药品 | 第28-29页 |
| 2.1.5 供试培养基 | 第29-30页 |
| 2.1.6 主要仪器设备 | 第30-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-54页 |
| 2.2.1 橡胶树叶片接菌处理 | 第31页 |
| 2.2.2 橡胶树叶片总RNA的提取与纯化 | 第31-32页 |
| 2.2.3 总RNA的质量和纯度检测 | 第32页 |
| 2.2.4 反转录cDNA第一链的合成 | 第32-33页 |
| 2.2.5 PCR验证 | 第33-34页 |
| 2.2.6 DDRT-PCR | 第34页 |
| 2.2.7 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第34-36页 |
| 2.2.8 回收差异cDNA片段与二次PCR扩增 | 第36页 |
| 2.2.9 二次PCR扩增产物的回收 | 第36页 |
| 2.2.10 反向Northern的验证 | 第36-38页 |
| 2.2.11 差异片段的克隆 | 第38-39页 |
| 2.2.12 测序及序列分析 | 第39-40页 |
| 2.2.13 台酚蓝染色 | 第40页 |
| 2.2.14 橡胶树不同品系叶片RNA的提取 | 第40-41页 |
| 2.2.15 反转录 | 第41页 |
| 2.2.16 橡胶树叶片DNA的提取 | 第41-42页 |
| 2.2.17 qRT-PCR分析差异表达序列 | 第42-44页 |
| 2.2.18 抗病基因ORF扩增 | 第44页 |
| 2.2.19 生物信息学分析 | 第44-45页 |
| 2.2.20 烟草植物表达载体构建 | 第45-46页 |
| 2.2.21 农杆菌介导法转化烟草 | 第46-47页 |
| 2.2.22 转基因烟草HbFer基因的测序 | 第47-48页 |
| 2.2.23 qRT-PCR检测HbFer基因的表达 | 第48-49页 |
| 2.2.24 基因组Southern分析 | 第49-50页 |
| 2.2.25 GUS染色 | 第50页 |
| 2.2.26 绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein)观察 | 第50-51页 |
| 2.2.27 转基因烟草抗病性测定 | 第51页 |
| 2.2.28 hpa1_(Xoo)基因转化橡胶树植物表达载体构建 | 第51-52页 |
| 2.2.29 橡胶树组织培养体系的建立 | 第52页 |
| 2.2.30 农杆菌侵染与转化 | 第52-53页 |
| 2.2.31 拟转基因GUS活性测定 | 第53页 |
| 2.2.32 拟转化植株的PCR验证 | 第53页 |
| 2.2.33 拟转化植株的PCR-Southern bloting检测 | 第53-54页 |
| 3 实验结果与分析 | 第54-91页 |
| 3.1 橡胶树品系RRIC52接种白粉菌表型观察 | 第54-55页 |
| 3.2 白粉菌接种橡胶树RRIC52不同时间段叶片总RNA的提取 | 第55页 |
| 3.3 DDRT-PCR预扩增筛选引物组合 | 第55-56页 |
| 3.4 SDS-PAGE聚丙烯凝胶电泳筛选差异条带 | 第56-58页 |
| 3.5 二次PCR验证差异条带 | 第58页 |
| 3.6 反向Northern杂交排除假阳性条带 | 第58-59页 |
| 3.7 菌液PCR与测序 | 第59-60页 |
| 3.8 差异条带序列分析 | 第60-61页 |
| 3.8.1 冗余片段的整理 | 第60页 |
| 3.8.2 差异筛选获得的ESTs与橡胶树基因组的比对结果 | 第60页 |
| 3.8.3 差异片段的同源性比较和基因功能的分析 | 第60-61页 |
| 3.9 橡胶树RRIC52和热研7-33-97对白粉菌抗性的比较 | 第61-62页 |
| 3.10 橡胶树RRIC52与热研7-33-97不同侵染时间段RNA的提取 | 第62-63页 |
| 3.11 橡胶树RRIC52与热研7-33-97叶片DNA的提取 | 第63页 |
| 3.12 qRT-PCR分析ESTs序列在白粉菌侵染过程抗感橡胶树的差异表达 | 第63-66页 |
| 3.13 与白粉菌侵染相关的基因克隆及功能推测 | 第66-77页 |
| 3.13.1 几丁质酶基因HBOH3的克隆及基因序列的生物信息学分析 | 第66-70页 |
| 3.13.2 铁蛋白基因的克隆及基因序列的生物信息学分析 | 第70-73页 |
| 3.13.3 WRKY基因HBOH14的克隆及基因序列的生物信息学分析 | 第73-75页 |
| 3.13.4 Cupin1基因HBOH15的克隆及基因序列的生物信息学分析 | 第75-77页 |
| 3.14 烟草转化植物表达载体PCAMBIA1 304-HbFer的构建 | 第77-78页 |
| 3.15 烟草的遗传转化再生体系的建立 | 第78页 |
| 3.16 拟转基因烟草的DNA和RNA提取 | 第78-79页 |
| 3.16.1 烟草DNA的提取 | 第78-79页 |
| 3.16.2 烟草总RNA的提取 | 第79页 |
| 3.17 拟转基因植株的PCR验证 | 第79-83页 |
| 3.17.1 待测烟草DNA中目的基因HbFer的PCR扩增 | 第79-80页 |
| 3.17.2 待测烟草DNA中载体基因GFP的PCR检测 | 第80页 |
| 3.17.3 待测烟草cDNA目的基因HbFer的PCR检测 | 第80-81页 |
| 3.17.4 利用DNAMAN软件对转基因烟草中HbFer基因测序结果进行序列比对 | 第81-83页 |
| 3.18 qRT-PCR检测转基因烟草株系中HbFer基因的表达量 | 第83页 |
| 3.19 拟转化烟草株系基因组Southern分析 | 第83-84页 |
| 3.20 转基因烟草叶片GUS染色 | 第84页 |
| 3.21 转基因烟草叶片绿色荧光GFP的观察 | 第84-85页 |
| 3.22 转基因烟草抗病性鉴定 | 第85-86页 |
| 3.23 橡胶树植物表达载体PCAMBIA2301 -hpa1_(Xoo)的构建 | 第86-87页 |
| 3.24 橡胶树组织培养进程 | 第87-88页 |
| 3.25 拟转化植株获得及GUS染色 | 第88-89页 |
| 3.26 拟转化植株PCR检测及PCR-Souhern bloting验证结果 | 第89-91页 |
| 4 讨论 | 第91-99页 |
| 4.1 橡胶树抗性品系RRIC52与白粉菌互作中与病原菌侵染相关基因的筛选 | 第91-94页 |
| 4.2 巴西橡胶树与白粉菌侵染相关基因的表达分析与基因克隆 | 第94-96页 |
| 4.3 橡胶树铁蛋白基因HbFer的克隆及转基因烟草的抗病性验证 | 第96-97页 |
| 4.4 hpa1_(Xoo)基因转化橡胶树遗传体系的探索 | 第97-99页 |
| 5 结论 | 第99-100页 |
| 5.1 本研究主要结论 | 第99页 |
| 5.2 本研究创新点 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-114页 |
| 附录 | 第114-122页 |
| 博士期间科研成果 | 第122-123页 |
| 致谢 | 第123页 |
