| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-33页 |
| 1.1 秀丽隐杆线虫的概述 | 第11-12页 |
| 1.2 秀丽隐杆线虫的嗅觉神经体系 | 第12-26页 |
| 1.2.1 秀丽隐杆线虫的神经细胞 | 第14-18页 |
| 1.2.2 Gproteincoupledreceptors(GPCRs) | 第18-20页 |
| 1.2.3 Toll样受体 | 第20页 |
| 1.2.4 G蛋白 | 第20-21页 |
| 1.2.5 细胞内的离子通道 | 第21-26页 |
| 1.3 根结线虫的防治 | 第26-27页 |
| 1.3.1 产吸引性物质的微生物对根结线虫的防治 | 第26-27页 |
| 1.3.2 产驱避性物质的微生物对根结线虫的防治 | 第27页 |
| 1.4 苯乙烯的应用及研究 | 第27-30页 |
| 1.4.1 苯乙烯的简介 | 第27-28页 |
| 1.4.2 苯乙烯的化工合成和生物合成 | 第28-29页 |
| 1.4.3 产苯乙烯微生物防治线虫的目的及意义 | 第29-30页 |
| 1.5 基因文库的构建及分析 | 第30-32页 |
| 1.5.1 基因文库研究及应用 | 第30-31页 |
| 1.5.2 cosmid载体 | 第31-32页 |
| 1.6 本研究的目的与意义 | 第32-33页 |
| 2 材料与方法 | 第33-52页 |
| 2.1 材料 | 第33-37页 |
| 2.1.1 供试菌株、线虫及植株 | 第33-35页 |
| 2.1.2 培养基与抗生素 | 第35页 |
| 2.1.3 主要溶液及试剂 | 第35-37页 |
| 2.1.3.1 仪器与耗材 | 第35-36页 |
| 2.1.3.2 主要试剂 | 第36-37页 |
| 2.2 研究方法 | 第37-52页 |
| 2.2.1 线虫冻存方法 | 第37页 |
| 2.2.2 线虫同步化 | 第37-38页 |
| 2.2.3 苯乙烯对秀丽隐杆线虫的驱避性检测 | 第38-39页 |
| 2.2.4 蕈状芽胞杆菌R2发酵液对秀丽隐杆线虫的抗虫活性测定 | 第39-40页 |
| 2.2.5 驱避剂对秀丽隐杆线虫的熏蒸作用 | 第40页 |
| 2.2.6 蕈状芽胞杆菌R2对苯乙烯耐受程度的检测 | 第40-41页 |
| 2.2.6.1 液体培养条件 | 第40页 |
| 2.2.6.2 固体培养条件 | 第40-41页 |
| 2.2.7 不同培养时间的R2发酵液对根结线虫虫卵孵化的抑制作用 | 第41页 |
| 2.2.8 线虫细胞内钙离子的荧光检测 | 第41-42页 |
| 2.2.9 R2的菌落对秀丽隐杆线虫的驱避作用 | 第42-43页 |
| 2.2.10 不同发酵时间的R2菌液产苯乙烯浓度检测 | 第43-44页 |
| 2.2.11 以苯丙氨酸和酪氨酸为底物的R2产苯乙烯的气相检测 | 第44页 |
| 2.2.12 cosmid基因文库构建 | 第44-52页 |
| 2.2.12.1 蕈状芽胞杆菌基因组DNA提取 | 第44-45页 |
| 2.2.12.2 蕈状芽胞杆菌基因组DNA的纯化 | 第45页 |
| 2.2.12.3 基因组DNA的部分酶切 | 第45-46页 |
| 2.2.11.4 碱裂解法提质粒 | 第46-47页 |
| 2.2.11.5 低溶点凝胶回收目的片段 | 第47-48页 |
| 2.2.11.6 载体SuperCosⅠ的处理 | 第48-49页 |
| 2.2.11.7 大肠杆菌DH5α感受肽的制备及转化 | 第49-50页 |
| 2.2.11.8 载体和目的片段的连接反应 | 第50页 |
| 2.2.11.9 噬菌体包装蛋白的体外包装 | 第50页 |
| 2.2.11.10 侵染宿主菌 | 第50-51页 |
| 2.2.11.11 文库质量的检测 | 第51页 |
| 2.2.11.12 质粒文库的保存 | 第51-52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-75页 |
| 3.1 线虫感知苯乙烯的嗅觉神经通路 | 第52-58页 |
| 3.1.1 秀丽隐杆线虫神经突变体的检测 | 第52-53页 |
| 3.1.2 秀丽隐杆线虫GPCRs突变体的检测 | 第53-54页 |
| 3.1.3 秀丽隐杆线虫G蛋白突变体的检测 | 第54-56页 |
| 3.1.4 秀丽隐杆线虫的细胞内离子通道相关突变体的检测 | 第56-57页 |
| 3.1.5 R2菌落对秀丽隐杆线虫的驱避作用 | 第57-58页 |
| 3.2 秀丽隐杆线虫感知苯乙烯的信号通路 | 第58-59页 |
| 3.3 Toll样受体突变株的检测 | 第59-60页 |
| 3.4 苯乙烯类似物及各种芳香烃对线虫的毒性检测 | 第60-62页 |
| 3.5 cmk-1突变株的体外荧光检测 | 第62-63页 |
| 3.6 蕈状芽胞杆菌对苯乙烯耐受能力的检测 | 第63-65页 |
| 3.6.1 固体培养基上蕈状芽胞杆菌对苯乙烯耐受能力的检测 | 第63-65页 |
| 3.6.2 液体培养基中蕈状芽胞杆菌对苯乙烯耐受能力的检测 | 第65页 |
| 3.7 不同体积苯乙烯熏蒸处理的线虫活性检测 | 第65-66页 |
| 3.8 检测不同时间的R2产苯乙烯的浓度变化 | 第66-67页 |
| 3.9 R2发酵液对根结线虫卵的抑孵作用 | 第67-68页 |
| 3.10 以苯丙氨酸和酪氨酸为底物的R2产苯乙烯的气相检测 | 第68-69页 |
| 3.11 基因文库构建 | 第69-75页 |
| 3.11.1 R2基因组DNA的部分酶切 | 第69页 |
| 3.11.2 supercosmidⅠ的酶切及去磷酸化 | 第69-70页 |
| 3.11.3 转化子抗线虫活性检测及筛选 | 第70-72页 |
| 3.11.4 2 号菌和3号菌质粒测序结果 | 第72-75页 |
| 4 讨论 | 第75-79页 |
| 4.1 结果和讨论 | 第75-78页 |
| 4.2 本论文的创新点 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
