| 摘要 | 第9-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 第1章 文献综述 | 第16-26页 |
| 1.1 家蚕生长发育的激素调控 | 第16-19页 |
| 1.1.1 家蚕生长周期 | 第16-17页 |
| 1.1.2 家蚕脂肪体的功能 | 第17页 |
| 1.1.3 家蚕生长发育的激素调控 | 第17-19页 |
| 1.2 FoxO的结构及翻译后修饰调节 | 第19-20页 |
| 1.2.1 FoxO的结构 | 第19页 |
| 1.2.2 FoxO翻译后修饰调节 | 第19-20页 |
| 1.3 FoxO的功能 | 第20-22页 |
| 1.3.1 FoxO在细胞增殖、分化中的功能 | 第20页 |
| 1.3.2 FoxO在免疫、寿命中的功能 | 第20-21页 |
| 1.3.3 FoxO对个体代谢的影响 | 第21-22页 |
| 1.4 FoxO与昆虫激素信号通路之间的相互作用 | 第22-24页 |
| 1.5 代谢组学研究进展 | 第24-26页 |
| 1.5.1 代谢组学基本研究流程 | 第24-25页 |
| 1.5.2 代谢组学的应用 | 第25-26页 |
| 第2章 引言 | 第26-28页 |
| 2.1 研究背景及目的意义 | 第26页 |
| 2.2 科学问题及研究内容 | 第26-27页 |
| 2.3 技术路线 | 第27-28页 |
| 第3章 BmFoxO基因基本表达特征分析 | 第28-46页 |
| 3.1 材料与方法 | 第28-32页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第28页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第28-29页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第29页 |
| 3.1.4 主要溶剂及配制 | 第29-32页 |
| 3.1.5 引物设计 | 第32页 |
| 3.2 实验方法 | 第32-38页 |
| 3.2.1 家蚕各组织总RNA提取 | 第32-33页 |
| 3.2.2 cDNA的制备及检测 | 第33页 |
| 3.2.3 荧光定量PCR | 第33-34页 |
| 3.2.4 重组表达载体构建 | 第34-36页 |
| 3.2.5 家蚕BmE细胞系培养 | 第36-38页 |
| 3.2.6 数据分析 | 第38页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第38-43页 |
| 3.3.1 BmFoxO表达谱分析 | 第38-39页 |
| 3.3.2 激素处理BmE细胞及离体培养的脂肪体对BmFoxO的表达调控 | 第39-41页 |
| 3.3.3 pSL1180-BmFoxO过表达载体构建 | 第41页 |
| 3.3.4 过表达BmFoxO检测 | 第41-42页 |
| 3.3.5 细胞凋亡和增殖检测 | 第42-43页 |
| 3.4 讨论 | 第43-46页 |
| 第4章 家蚕BmFoxO基因对营养代谢的影响 | 第46-56页 |
| 4.1 材料与方法 | 第46-47页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第46页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第46页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第46页 |
| 4.1.4 引物设计 | 第46-47页 |
| 4.2 实验方法 | 第47-49页 |
| 4.2.1 饥饿处理家蚕 | 第47-48页 |
| 4.2.2 家蚕血淋巴中海藻糖浓度测定 | 第48页 |
| 4.2.3 家蚕脂肪体中糖原含量测定 | 第48页 |
| 4.2.4 家蚕脂肪体中甘油三酯含量测定 | 第48-49页 |
| 4.2.5 组织总RNA提取 | 第49页 |
| 4.2.6 细胞总RNA提取 | 第49页 |
| 4.2.7 荧光定量PCR | 第49页 |
| 4.2.8 细胞转染 | 第49页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第49-53页 |
| 4.3.1 饥饿处理后生理指标检测 | 第49-50页 |
| 4.3.2 饥饿处理后脂代谢相关基因检测 | 第50-52页 |
| 4.3.3 胰岛素通路中关键基因对饥饿的响应 | 第52页 |
| 4.3.4 细胞水平检测BmFoxO对糖、脂代谢相关基因的影响 | 第52-53页 |
| 4.4 讨论 | 第53-56页 |
| 第5章 过表达BmFoxO转基因品系的建立及检测 | 第56-68页 |
| 5.1 材料与方法 | 第56-57页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第56页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第56页 |
| 5.1.3 实验仪器 | 第56页 |
| 5.1.4 引物设计 | 第56-57页 |
| 5.2 实验方法 | 第57-60页 |
| 5.2.1 过表达载体pSL1180[hr3-A4-BmFoxO-SV40]的构建 | 第57页 |
| 5.2.2 转基因过表达载体构建 | 第57页 |
| 5.2.3 蚕卵显微注射 | 第57页 |
| 5.2.4 转基因家蚕获得 | 第57页 |
| 5.2.5 插入位点检测 | 第57-59页 |
| 5.2.6 荧光定量PCR检测转基因家蚕及正常家蚕BmFoxO表达情况 | 第59页 |
| 5.2.7 RT-PCR检测转基因家蚕及正常家蚕BmFoxO表达情况 | 第59-60页 |
| 5.3 实验结果 | 第60-66页 |
| 5.3.1 转基因载体构建 | 第60-61页 |
| 5.3.2 转基因家蚕的获得 | 第61-62页 |
| 5.3.3 转基因家蚕插入位点检测 | 第62-63页 |
| 5.3.4 转基因家蚕分子水平检测 | 第63-64页 |
| 5.3.5 转基因家蚕表型观察 | 第64-65页 |
| 5.3.6 Insulin-TOR通路生长相关基因检测 | 第65页 |
| 5.3.7 转基因家蚕糖脂代谢相关基因检测 | 第65-66页 |
| 5.4 讨论 | 第66-68页 |
| 第6章 过表达BmFoxO转基因家蚕血淋巴代谢组学分析 | 第68-78页 |
| 6.1 材料与方法 | 第68-69页 |
| 6.1.1 实验材料 | 第68页 |
| 6.1.2 实验试剂 | 第68页 |
| 6.1.3 实验耗材及仪器 | 第68页 |
| 6.1.4 主要溶液配制 | 第68-69页 |
| 6.2 实验方法 | 第69-70页 |
| 6.2.1 油红O检测脂肪体中甘油三酯含量 | 第69页 |
| 6.2.2 家蚕血淋巴中葡萄糖、海藻糖浓度测定 | 第69页 |
| 6.2.3 家蚕血淋巴中甘油三酯含量测定 | 第69页 |
| 6.2.4 GC-MS血淋巴样品处理 | 第69页 |
| 6.2.5 GC-MS分析条件 | 第69-70页 |
| 6.2.6 GC-MS数据处理及分析 | 第70页 |
| 6.3 实验结果与分析 | 第70-76页 |
| 6.3.1 转基因家蚕生理指标检测 | 第70-71页 |
| 6.3.2 GC-MS代谢表型多元统计分析 | 第71-73页 |
| 6.3.3 GC-MS差异代谢物鉴定 | 第73-74页 |
| 6.3.4 差异代谢物途径定位 | 第74-75页 |
| 6.3.5 差异代谢物代谢通路分析 | 第75-76页 |
| 6.4 讨论 | 第76-78页 |
| 第7章 综合与结论 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-90页 |
| 附录 | 第90-92页 |
| 在读期间发表论文及参研课题 | 第92-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
