| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩写词 | 第12-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-32页 |
| 1.1 糖类 | 第13页 |
| 1.2 酶法合成糖苷 | 第13-17页 |
| 1.2.1 糖基转移酶 | 第13-14页 |
| 1.2.2 糖苷酶 | 第14-17页 |
| 1.3 酚类化合物的酶法糖基化研究进展 | 第17-29页 |
| 1.3.1 酚类化合物的生物学功能 | 第17-18页 |
| 1.3.2 酶法糖基化酚类化合物 | 第18-29页 |
| 1.4 β-半乳糖苷酶的转苷研究及其分子改造 | 第29-30页 |
| 1.5 本论文的研究内容及意义 | 第30-32页 |
| 第二章 β-半乳糖苷酶BgaL3的定点突变及突变酶W980F性质研究 | 第32-49页 |
| 2.1 材料与方法 | 第32-39页 |
| 2.1.1 主要试剂与仪器 | 第32-33页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第33页 |
| 2.1.3 培养基和培养条件 | 第33页 |
| 2.1.4 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第33-34页 |
| 2.1.5 分子操作技术 | 第34-36页 |
| 2.1.6 重组质粒的CaCl_2转化法 | 第36-37页 |
| 2.1.8 β-半乳糖苷酶活性的测定 | 第37页 |
| 2.1.9 β-半乳糖苷酶突变酶转酚活性的筛选 | 第37页 |
| 2.1.10 β-半乳糖苷酶突变酶的纯化 | 第37-38页 |
| 2.1.11 β-半乳糖苷酶突变酶的酶学性质研究 | 第38页 |
| 2.1.12 蛋白质SDS-PAGE | 第38-39页 |
| 2.1.13 TLC分析 | 第39页 |
| 2.2 结果 | 第39-47页 |
| 2.2.1 BgaL3序列的生物信息学分析 | 第39-40页 |
| 2.2.2 BgaL3的点饱和突变及突变酶的筛选 | 第40-41页 |
| 2.2.3 β-半乳糖苷酶W980F的纯化 | 第41-42页 |
| 2.2.4 β-半乳糖苷酶W980F的酶学性质 | 第42-43页 |
| 2.2.5 β-半乳糖苷酶W980F的水解底物特异性 | 第43-47页 |
| 2.3 讨论 | 第47-48页 |
| 本章小结 | 第48-49页 |
| 第三章 W980F突变糖苷酶糖基化酚类化合物的研究 | 第49-64页 |
| 3.1 材料与方法 | 第50-52页 |
| 3.1.1 试剂和仪器 | 第50页 |
| 3.1.2 培养基和培养条件 | 第50页 |
| 3.1.3 酚类及其他化合物的转苷活性检测 | 第50-51页 |
| 3.1.4 酚类化合物糖苷的分离纯化 | 第51-52页 |
| 3.1.5 酚类糖苷化合物的结构鉴定 | 第52页 |
| 3.2 结果 | 第52-62页 |
| 3.2.1 W980F对多种酚类及其他化合物的转苷活性检测 | 第52-53页 |
| 3.2.2 W980F以苯酚为受体转苷产物纯化和鉴定 | 第53-55页 |
| 3.2.3 W980F以对苯二酚为受体转苷产物纯化和鉴定 | 第55-56页 |
| 3.2.4 W980F以邻苯二酚为受体转苷产物纯化和鉴定 | 第56-57页 |
| 3.2.5 W980F以焦性没食子酸为受体转苷产物纯化和鉴定 | 第57-59页 |
| 3.2.6 W980F以咖啡酸为受体转苷产物纯化和鉴定 | 第59-60页 |
| 3.2.7 W980F以间苯三酚为受体转苷产物纯化和鉴定 | 第60-62页 |
| 3.3 讨论 | 第62-63页 |
| 本章小结 | 第63-64页 |
| 第四章 β-半乳糖苷酶BgaL3的随机突变及白藜芦醇的糖基化研究 | 第64-74页 |
| 4.1 材料与方法 | 第64-67页 |
| 4.1.1 试剂和仪器 | 第64页 |
| 4.1.2 菌种和质粒 | 第64-65页 |
| 4.1.3 易错PCR | 第65页 |
| 4.1.4 定点突变 | 第65-66页 |
| 4.1.5 白藜芦醇转苷反应 | 第66页 |
| 4.1.6 白藜芦醇糖苷HPLC分离纯化 | 第66-67页 |
| 4.2 结果 | 第67-72页 |
| 4.2.1 β-半乳糖苷酶的随机突变及筛选 | 第67-68页 |
| 4.2.2 突变酶252的序列分析及定点突变 | 第68-69页 |
| 4.2.3 突变酶252以白藜芦醇为受体的转糖基反应 | 第69页 |
| 4.2.4 白藜芦醇糖苷产物的分离纯化及初步鉴定 | 第69-72页 |
| 4.3 讨论 | 第72-73页 |
| 本章小结 | 第73-74页 |
| 附录 | 第74-84页 |
| 参考文献 | 第84-90页 |
| 论文发表 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第92页 |
