| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩略语对照表 | 第12-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-25页 |
| 1 肝细胞癌研究现状 | 第14-16页 |
| 2 糖基化修饰与癌症 | 第16-19页 |
| 2.1 糖基化的概念及意义 | 第16页 |
| 2.2 N-糖基化修饰在癌症中的作用 | 第16-17页 |
| 2.3 O-糖基化修饰在癌症中的作用 | 第17-19页 |
| 3 凝集素在糖组学中的应用 | 第19-23页 |
| 3.1 凝集素及其分类 | 第19-20页 |
| 3.2 凝集素在癌症研究中的应用 | 第20-21页 |
| 3.3 凝集素在癌症治疗中的应用 | 第21-22页 |
| 3.4 凝集素芯片在癌症研究中的应用 | 第22-23页 |
| 4 GRP78在癌症侵袭转移研究中的研究进展 | 第23-25页 |
| 第二章 凝集素BS-I通过AKT/GSK-3β/β-catenin通路抑制肝癌细胞迁移及侵袭的机制研宄 | 第25-67页 |
| 前言 | 第25-26页 |
| 1 材料 | 第26-31页 |
| 1.1 主要仪器设备 | 第26页 |
| 1.2 主要实验试剂及耗材 | 第26-28页 |
| 1.3 其它材料 | 第28-29页 |
| 1.3.1 细胞株 | 第28页 |
| 1.3.2 Grp78及p85过表达质粒 | 第28-29页 |
| 1.4 实验主要溶液配方 | 第29-31页 |
| 2 方法 | 第31-42页 |
| 2.1 细胞培养 | 第31页 |
| 2.2 环氧化片基的制备 | 第31页 |
| 2.3 凝集素芯片的制备 | 第31-32页 |
| 2.4 细胞凝集素芯片 | 第32页 |
| 2.5 芯片分析数据 | 第32-33页 |
| 2.6 凝集素组化 | 第33页 |
| 2.7 MTT实验 | 第33-34页 |
| 2.8 TRANSWELL小室法检测肝癌细胞迁移及侵袭能力 | 第34页 |
| 2.9 蛋白提取 | 第34-35页 |
| 2.9.1 细胞膜蛋白提取 | 第34-35页 |
| 2.9.2 细胞胞浆及核蛋白提取 | 第35页 |
| 2.9.3 总蛋白提取 | 第35页 |
| 2.10 LC-ORBITRAP MS/MS鉴定BS-I结合膜糖蛋白 | 第35-37页 |
| 2.10.1 磁性微粒富集BS-I结合膜糖蛋白 | 第35-36页 |
| 2.10.2 蛋白银染鉴定 | 第36页 |
| 2.10.3 糖蛋白酶解 | 第36页 |
| 2.10.4 LC-Orbitrap MS/MS鉴定蛋白 | 第36-37页 |
| 2.10.5 质谱数据分析 | 第37页 |
| 2.11 免疫印迹实验 | 第37-38页 |
| 2.11.1 蛋白电泳 | 第37-38页 |
| 2.11.2 转膜、封闭及抗体杂交 | 第38页 |
| 2.11.3 目的条带检测 | 第38页 |
| 2.12 免疫沉淀及免疫共沉淀实验 | 第38-39页 |
| 2.12.1 BS-I免疫沉淀实验 | 第38页 |
| 2.12.2 Grp78免疫沉淀及免疫共沉淀实验 | 第38-39页 |
| 2.13 瞬时转染 | 第39-42页 |
| 2.13.1 Grp78过表达质粒构建 | 第39-41页 |
| 2.13.2 p85过表达质粒活化及提取 | 第41-42页 |
| 2.13.3 瞬时转染 | 第42页 |
| 3 结果 | 第42-63页 |
| 3.1 细胞凝集素芯片筛选发现凝集素BS-I与肝癌细胞转移相关 | 第42-46页 |
| 3.2 凝集素BS-I抑制转移性肝癌细胞的迁移及侵袭 | 第46-48页 |
| 3.3 凝集素BS-I通过AKT/GSK- 3BETA/BETA-CATENIN通路抑制肝癌细胞迁移及侵袭 | 第48-50页 |
| 3.4 GSK-3B的抑制剂逆转凝集素BS-I对肝癌细胞迁移及侵袭的抑制作用 | 第50-53页 |
| 3.5 凝集素BS-I抑制转移性肝癌细胞的迁移及侵袭依赖于BS-I与细胞表面GalNAc糖结构的结合 | 第53-56页 |
| 3.6 凝集素BS-I识别细胞膜上的GRP78分子并与之结合 | 第56-58页 |
| 3.7 凝集素BS-I诱导细胞膜GRP78下调表达并抑制GRP78与P85的结合 | 第58-60页 |
| 3.8 过表达Grp78及p85逆转凝集素BS-I抑制肝癌细胞迁移及侵袭的抑制作用 | 第60-63页 |
| 4 讨论 | 第63-67页 |
| 第三章 GRP78 O-GALNAC糖基化对肝癌细胞迁移及侵袭的影响及其机制研究 | 第67-96页 |
| 前言 | 第67-69页 |
| 1 材料 | 第69-70页 |
| 1.1 主要仪器设备 | 第69页 |
| 1.2 主要实验试剂 | 第69页 |
| 1.3 其他材料 | 第69页 |
| 1.3.1 细胞株 | 第69页 |
| 1.3.2 Grp78突变引物设计与合成 | 第69页 |
| 1.4 实验溶液配方 | 第69-70页 |
| 2 方法 | 第70-78页 |
| 2.1 GRP78 N-糖基化位点及O-GALNAC糖基化位点分析 | 第70页 |
| 2.2 GRP78糖基化位点突变质粒构建 | 第70-73页 |
| 2.2.1 Grp78 A-his质粒构建 | 第70-72页 |
| 2.2.2 Grp78 O-GalNAc糖基化位点突变质粒构建 | 第72-73页 |
| 2.3 瞬时转染 | 第73-74页 |
| 2.4 蛋白提取 | 第74页 |
| 2.5 免疫印迹实验 | 第74页 |
| 2.6 PNGASE F酶解蛋白 | 第74页 |
| 2.7 考马斯亮蓝染色 | 第74-75页 |
| 2.8 膜GRP78分离纯化 | 第75-76页 |
| 2.8.1 膜Grp78蛋白富集 | 第75页 |
| 2.8.2 膜Grp78蛋白富集效果鉴定 | 第75页 |
| 2.8.3 SDS-PAGE胶分离膜Grp78蛋白及纯化回收 | 第75-76页 |
| 2.9 凝集素芯片检测分析膜GRP78 O-糖基化 | 第76-77页 |
| 2.10 免疫沉淀实验 | 第77页 |
| 2.10.1 VVA免疫沉淀实验 | 第77页 |
| 2.10.2 Grp78免疫共沉淀实验 | 第77页 |
| 2.11 MTT检测细胞增殖 | 第77页 |
| 2.12 TRANSWELL小室法检测肝癌细胞迁移及侵袭能力 | 第77-78页 |
| 3 结果 | 第78-93页 |
| 3.1 Grp78 △-his及糖基化位点突变质粒构建 | 第78-79页 |
| 3.2 细胞膜GRP78不存在N-糖基化修饰 | 第79-80页 |
| 3.3 凝集素芯片检测膜GRP78蛋白O-糖基化修饰 | 第80-84页 |
| 3.4 GRP78蛋白637位点存在O-GALNAC糖基化修饰 | 第84-86页 |
| 3.5 GRP78 637位点的O-GALNAC糖基化修饰影响其促进肝癌细胞增殖 | 第86页 |
| 3.6 GRP78 637位点的O-GALNAC糖基化修饰影响其促进肝癌细胞迁移 | 第86-87页 |
| 3.7 GRP78 637位点的O-GALNAC糖基化修饰影响其促进肝癌细胞侵袭 | 第87-89页 |
| 3.8 GRP78 637位点的O-GALNAC糖基化修饰影响其促进上皮间质转化(EMT) | 第89-90页 |
| 3.9 GRP78 637位点的O-GALNAC糖基化修饰影响其对AKT/GSK3β/β-CATENIN通路的激活 | 第90-92页 |
| 3.10 GRP78 637位点的O-GALNAC糖基化修饰影响GRP78分子的细胞膜转位并抑制GRP78-P85复合体的形成 | 第92-93页 |
| 4 讨论 | 第93-96页 |
| 参考文献 | 第96-109页 |
| 全文小结 | 第109-110页 |
| 博士期间发表论文及参与课题情况 | 第110-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 作者简介 | 第112页 |
