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神经管缺陷猴模型的建立及多胎妊娠减胎实验的研究

摘要第6-8页
Abstract第8-10页
缩略词第18-19页
第一章 绪论第19-35页
    1.1 研究背景第19-35页
        1.1.1 神经管缺陷第19-20页
        1.1.2 神经管闭合第20-21页
        1.1.3 叶酸与NTDs第21页
        1.1.4 PCP信号通路第21-23页
            1.1.4.1 PCP信号通路的相关基因第22-23页
        1.1.5 CE在神经管形成中的作用第23页
        1.1.6 PCP信号通路与NTDs第23-25页
        1.1.7 SHROOM3基因与NTDs第25-26页
        1.1.8 VANGL1基因与NTDs第26页
        1.1.9 VANGL2基因与NTDs第26-27页
        1.1.10 WNT5A基因与NTDs第27页
        1.1.11 基因编辑技术第27-31页
            1.1.11.1 ZFN基因编辑技术第28-29页
            1.1.11.2 TALENs基因编辑技术第29页
            1.1.11.3 CRISPR/Cas9基因编辑技术第29-31页
        1.1.12 NTDs动物模型研究进展第31-32页
        1.1.13 多胎妊娠减胎术第32-35页
第二章 基因敲除胚胎的建立和sgRNA的设计及效率测试第35-43页
    2.1 材料第35-38页
        2.1.1 实验动物及其他材料第35页
        2.1.2 实验仪器与设备第35-36页
        2.1.3 实验试剂与药品第36-37页
        2.1.4 主要溶液配制第37-38页
    2.2 实验方法第38-40页
        2.2.1 卵母细胞的筛选及体外培养第38-39页
            2.2.1.1 试剂、培养基的准备第38页
            2.2.1.2 卵母细胞的筛选及体外培养第38-39页
        2.2.2 体外受精第39-40页
            2.2.2.1 精子的预处理第39页
            2.2.2.2 精子获能第39页
            2.2.2.3 体外受精(IVF)第39-40页
        2.2.3 1-细胞期胚胎注射Cas9/sgRNA第40页
    2.3 实验结果与分析第40-41页
        2.3.1 成功获得受精卵并成功注射sgRNA和Cas9D10A蛋白第40-41页
    2.4 讨论第41页
    2.5 小结第41-43页
第三章 检测单敲SHROOM3基因敲除情况第43-56页
    3.1 材料第43-45页
        3.1.1 胚胎和组织第43页
        3.1.2 实验仪器与设备第43-44页
        3.1.3 实验试剂与药品第44-45页
        3.1.4 主要溶液配制第45页
    3.2 实验方法第45-51页
        3.2.1 食蟹猴胚胎单细胞DNA的扩增第45-46页
        3.2.2 出生小猴组织和血液的DNA提取第46-48页
            3.2.2.1 出生小猴血液提取DNA(试剂盒:Wizard@genomicDNApurificationkit)第46-47页
            3.2.2.2 出生小猴组织提取DNA(酚-氯仿法)第47-48页
        3.2.3 SHROOM3基因的片段扩增第48页
        3.2.4 PCR产物的回收第48-50页
            3.2.4.1 PCR产物直接回收第48-49页
            3.2.4.2 琼脂糖凝胶回收PCR产物第49-50页
        3.2.5 T7酶切第50-51页
        3.2.6 测序第51页
    3.3 实验结果与分析第51-54页
        3.3.1 成功获得单敲SHROOM3基因敲除的胚胎第51-54页
    3.4 讨论第54页
    3.5 小结第54-56页
第四章 在食蟹猴胚胎上同时敲除SHROOM3、VANGL2以及WNT5A三个基因第56-63页
    4.1 材料第56-57页
        4.1.1 胚胎及组织第56页
        4.1.2 实验仪器与设备第56页
        4.1.3 实验试剂与药品第56页
        4.1.4 主要溶液配制第56-57页
    4.2 实验方法第57页
        4.2.1 食蟹猴猴胚胎单细胞DNA的扩增第57页
        4.2.2 流产猴组织提取DNA(酚-氯仿法)第57页
        4.2.3 SHROOM3、VANGL2以及WNT5A三个基因片段的扩增第57页
        4.2.4 PCR产物的回收第57页
            4.2.4.1 PCR产物直接回收第57页
            4.2.4.2 琼脂糖凝胶回收PCR产物第57页
        4.2.5 T7酶切第57页
        4.2.6 测序第57页
    4.3 实验结果与分析第57-61页
        4.3.1 获得两个基因同时敲除的胚胎第57-61页
    4.4 讨论第61页
    4.5 小结第61-63页
第五章 多胎孕猴经腹氯化钾减胎术10例分析第63-68页
    5.1 材料第63-64页
        5.1.1 实验动物第63页
        5.1.2 实验仪器与设备第63页
        5.1.3 实验试剂与药品第63页
        5.1.4 主要溶液配置第63-64页
    5.2 实验方法第64页
        5.2.1 减胎手术第64页
    5.3 实验结果与分析第64-66页
        5.3.1 减胎方法的建立及减胎结果第64-65页
        5.3.2 减胎后的妊娠及出生情况第65-66页
    5.4 讨论第66-67页
    5.5 结论第67-68页
第六章 实验结论第68-69页
致谢第69-70页
参考文献第70-78页
附录1 攻读硕士学位期间发表论文题目第78-79页
附录2 攻读硕士学位期间参与的科研项目第79-80页
附录3 基因序列第80-82页
附录4 引物序列第82-83页
附录5 多胎妊娠孕猴信息第83页

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