| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略词 | 第18-19页 |
| 第一章 绪论 | 第19-35页 |
| 1.1 研究背景 | 第19-35页 |
| 1.1.1 神经管缺陷 | 第19-20页 |
| 1.1.2 神经管闭合 | 第20-21页 |
| 1.1.3 叶酸与NTDs | 第21页 |
| 1.1.4 PCP信号通路 | 第21-23页 |
| 1.1.4.1 PCP信号通路的相关基因 | 第22-23页 |
| 1.1.5 CE在神经管形成中的作用 | 第23页 |
| 1.1.6 PCP信号通路与NTDs | 第23-25页 |
| 1.1.7 SHROOM3基因与NTDs | 第25-26页 |
| 1.1.8 VANGL1基因与NTDs | 第26页 |
| 1.1.9 VANGL2基因与NTDs | 第26-27页 |
| 1.1.10 WNT5A基因与NTDs | 第27页 |
| 1.1.11 基因编辑技术 | 第27-31页 |
| 1.1.11.1 ZFN基因编辑技术 | 第28-29页 |
| 1.1.11.2 TALENs基因编辑技术 | 第29页 |
| 1.1.11.3 CRISPR/Cas9基因编辑技术 | 第29-31页 |
| 1.1.12 NTDs动物模型研究进展 | 第31-32页 |
| 1.1.13 多胎妊娠减胎术 | 第32-35页 |
| 第二章 基因敲除胚胎的建立和sgRNA的设计及效率测试 | 第35-43页 |
| 2.1 材料 | 第35-38页 |
| 2.1.1 实验动物及其他材料 | 第35页 |
| 2.1.2 实验仪器与设备 | 第35-36页 |
| 2.1.3 实验试剂与药品 | 第36-37页 |
| 2.1.4 主要溶液配制 | 第37-38页 |
| 2.2 实验方法 | 第38-40页 |
| 2.2.1 卵母细胞的筛选及体外培养 | 第38-39页 |
| 2.2.1.1 试剂、培养基的准备 | 第38页 |
| 2.2.1.2 卵母细胞的筛选及体外培养 | 第38-39页 |
| 2.2.2 体外受精 | 第39-40页 |
| 2.2.2.1 精子的预处理 | 第39页 |
| 2.2.2.2 精子获能 | 第39页 |
| 2.2.2.3 体外受精(IVF) | 第39-40页 |
| 2.2.3 1-细胞期胚胎注射Cas9/sgRNA | 第40页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第40-41页 |
| 2.3.1 成功获得受精卵并成功注射sgRNA和Cas9D10A蛋白 | 第40-41页 |
| 2.4 讨论 | 第41页 |
| 2.5 小结 | 第41-43页 |
| 第三章 检测单敲SHROOM3基因敲除情况 | 第43-56页 |
| 3.1 材料 | 第43-45页 |
| 3.1.1 胚胎和组织 | 第43页 |
| 3.1.2 实验仪器与设备 | 第43-44页 |
| 3.1.3 实验试剂与药品 | 第44-45页 |
| 3.1.4 主要溶液配制 | 第45页 |
| 3.2 实验方法 | 第45-51页 |
| 3.2.1 食蟹猴胚胎单细胞DNA的扩增 | 第45-46页 |
| 3.2.2 出生小猴组织和血液的DNA提取 | 第46-48页 |
| 3.2.2.1 出生小猴血液提取DNA(试剂盒：Wizard@genomicDNApurificationkit) | 第46-47页 |
| 3.2.2.2 出生小猴组织提取DNA(酚-氯仿法) | 第47-48页 |
| 3.2.3 SHROOM3基因的片段扩增 | 第48页 |
| 3.2.4 PCR产物的回收 | 第48-50页 |
| 3.2.4.1 PCR产物直接回收 | 第48-49页 |
| 3.2.4.2 琼脂糖凝胶回收PCR产物 | 第49-50页 |
| 3.2.5 T7酶切 | 第50-51页 |
| 3.2.6 测序 | 第51页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第51-54页 |
| 3.3.1 成功获得单敲SHROOM3基因敲除的胚胎 | 第51-54页 |
| 3.4 讨论 | 第54页 |
| 3.5 小结 | 第54-56页 |
| 第四章 在食蟹猴胚胎上同时敲除SHROOM3、VANGL2以及WNT5A三个基因 | 第56-63页 |
| 4.1 材料 | 第56-57页 |
| 4.1.1 胚胎及组织 | 第56页 |
| 4.1.2 实验仪器与设备 | 第56页 |
| 4.1.3 实验试剂与药品 | 第56页 |
| 4.1.4 主要溶液配制 | 第56-57页 |
| 4.2 实验方法 | 第57页 |
| 4.2.1 食蟹猴猴胚胎单细胞DNA的扩增 | 第57页 |
| 4.2.2 流产猴组织提取DNA(酚-氯仿法) | 第57页 |
| 4.2.3 SHROOM3、VANGL2以及WNT5A三个基因片段的扩增 | 第57页 |
| 4.2.4 PCR产物的回收 | 第57页 |
| 4.2.4.1 PCR产物直接回收 | 第57页 |
| 4.2.4.2 琼脂糖凝胶回收PCR产物 | 第57页 |
| 4.2.5 T7酶切 | 第57页 |
| 4.2.6 测序 | 第57页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第57-61页 |
| 4.3.1 获得两个基因同时敲除的胚胎 | 第57-61页 |
| 4.4 讨论 | 第61页 |
| 4.5 小结 | 第61-63页 |
| 第五章 多胎孕猴经腹氯化钾减胎术10例分析 | 第63-68页 |
| 5.1 材料 | 第63-64页 |
| 5.1.1 实验动物 | 第63页 |
| 5.1.2 实验仪器与设备 | 第63页 |
| 5.1.3 实验试剂与药品 | 第63页 |
| 5.1.4 主要溶液配置 | 第63-64页 |
| 5.2 实验方法 | 第64页 |
| 5.2.1 减胎手术 | 第64页 |
| 5.3 实验结果与分析 | 第64-66页 |
| 5.3.1 减胎方法的建立及减胎结果 | 第64-65页 |
| 5.3.2 减胎后的妊娠及出生情况 | 第65-66页 |
| 5.4 讨论 | 第66-67页 |
| 5.5 结论 | 第67-68页 |
| 第六章 实验结论 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-78页 |
| 附录1 攻读硕士学位期间发表论文题目 | 第78-79页 |
| 附录2 攻读硕士学位期间参与的科研项目 | 第79-80页 |
| 附录3 基因序列 | 第80-82页 |
| 附录4 引物序列 | 第82-83页 |
| 附录5 多胎妊娠孕猴信息 | 第83页 |
