| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7页 |
| 英文缩略表 | 第11-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-25页 |
| 1.1 葡萄糖氧化酶概述 | 第12-15页 |
| 1.1.1 葡萄糖氧化酶催化机制 | 第12页 |
| 1.1.2 葡萄糖氧化酶来源 | 第12-13页 |
| 1.1.3 葡萄糖氧化酶酶学性质 | 第13-14页 |
| 1.1.4 葡萄糖氧化酶应用 | 第14-15页 |
| 1.2 葡萄糖氧化酶的生产 | 第15-16页 |
| 1.2.1 葡萄糖氧化酶基因原核表达的研究进展 | 第15页 |
| 1.2.2 葡萄糖氧化酶基因真核表达的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.3 葡萄糖氧化酶的分子改良研究 | 第16-18页 |
| 1.3.1 葡萄糖氧化酶的结构 | 第16-17页 |
| 1.3.2 葡萄糖氧化酶的催化活性中心 | 第17页 |
| 1.3.3 葡萄糖氧化酶的分子改良研究 | 第17-18页 |
| 1.4 毕赤酵母表达系统 | 第18-24页 |
| 1.4.1 毕赤酵母表达载体及宿主 | 第19-20页 |
| 1.4.2 提高外源蛋白表达的策略 | 第20-21页 |
| 1.4.3 提高外源蛋白折叠及分泌效率的途径 | 第21-24页 |
| 1.5 论文主要研究内容 | 第24-25页 |
| 1.5.1 立题依据及研究意义 | 第24页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第24-25页 |
| 第二章 共表达SEC61、PDI、ERO1和HAC1对GOD分泌表达的影响 | 第25-47页 |
| 2.1 前言 | 第25页 |
| 2.2 材料与方法 | 第25-34页 |
| 2.2.1 菌株与质粒 | 第25-26页 |
| 2.2.2 试剂与仪器 | 第26页 |
| 2.2.3 培养基 | 第26-27页 |
| 2.2.4 重组菌的构建方法 | 第27-31页 |
| 2.2.5 重组毕赤酵母工程菌株的构建 | 第31-33页 |
| 2.2.6 重组毕赤酵母PCR鉴定 | 第33页 |
| 2.2.7 GOD酶液诱导方法 | 第33页 |
| 2.2.8 GOD酶活测定方法 | 第33-34页 |
| 2.3 结果 | 第34-45页 |
| 2.3.1 重组SEC61、ERO1、HAC1共表达基因工程菌株的构建 | 第34-38页 |
| 2.3.2 重组毕赤酵母PCR的鉴定 | 第38-40页 |
| 2.3.3 共表达SEC61、PDI、ERO1和HAC1基因对GOD表达的影响 | 第40-45页 |
| 2.4 讨论 | 第45-46页 |
| 2.5 小结 | 第46-47页 |
| 第三章 分子改良提高GOD热稳定性研究 | 第47-60页 |
| 3.1 前言 | 第47页 |
| 3.2 材料与方法 | 第47-54页 |
| 3.2.1 菌株与质粒 | 第47页 |
| 3.2.2 试剂与仪器 | 第47页 |
| 3.2.3 培养基 | 第47-48页 |
| 3.2.4 体外重组法构建饱和突变载体 | 第48-51页 |
| 3.2.5 重组质粒转化E.coliTrans1-T1感受态细胞 | 第51页 |
| 3.2.6 重组质粒在毕赤酵母GS115中的表达 | 第51页 |
| 3.2.7 平板显色筛选阳性克隆 | 第51-52页 |
| 3.2.8 GOD酶液诱导 | 第52页 |
| 3.2.9 酶活热稳定性的初步筛选 | 第52页 |
| 3.2.10 GOD粗酶液的脱盐和纯化 | 第52-53页 |
| 3.2.11 GOD蛋白浓度的测定 | 第53页 |
| 3.2.12 重组葡萄糖氧化酶的热稳定性研究 | 第53-54页 |
| 3.3 结果 | 第54-58页 |
| 3.3.1 GOD分子改良位点分析 | 第54页 |
| 3.3.2 突变型GOD构建表达及分离纯化 | 第54-55页 |
| 3.3.3 饱和突变改造对GOD热稳定性的影响 | 第55-57页 |
| 3.3.4 突变体GOD蛋白结构模拟分析 | 第57-58页 |
| 3.4 讨论 | 第58页 |
| 3.5 小结 | 第58-60页 |
| 第四章 全文结论 | 第60-61页 |
| 主要结论 | 第60页 |
| 展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 作者简历 | 第70页 |
