| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 绪论 | 第9-29页 |
| 1.1 蛋白质系统简介 | 第9-10页 |
| 1.2 分子伴侣概念 | 第10-19页 |
| 1.2.1 分子伴侣蛋白的发现 | 第12-13页 |
| 1.2.2 分子伴侣分类 | 第13-15页 |
| 1.2.3 常见的分子伴侣 | 第15-19页 |
| 1.2.3.1 GroEL/GroES系统 | 第15页 |
| 1.2.3.2 GroEL的结构 | 第15-16页 |
| 1.2.3.3 GroEL的作用机制 | 第16-17页 |
| 1.2.3.4 GroEL的底物 | 第17-18页 |
| 1.2.3.5 DnaK的结构 | 第18页 |
| 1.2.3.6 DnaK/DnaJ系统 | 第18-19页 |
| 1.3 新型分子伴侣蛋白Spy | 第19-26页 |
| 1.3.1 新型分子伴侣蛋白Spy的发现 | 第20-23页 |
| 1.3.2 分子伴侣蛋白Spy的功能 | 第23-24页 |
| 1.3.3 新型分子伴侣蛋白Spy研究现状 | 第24-25页 |
| 1.3.4 分子伴侣蛋白Spy活性强突变体的筛选 | 第25-26页 |
| 1.4 研究目标 | 第26-28页 |
| 1.4.1 研究内容 | 第26页 |
| 1.4.2 将Spy疏水性氨基酸突变为亲水性氨基酸 | 第26-27页 |
| 1.4.3 Spy与Im7的相互作用强弱检测 | 第27页 |
| 1.4.4 纯化出活性较弱的Spy突变体,测活性及稳定性 | 第27-28页 |
| 1.5 技术路线与可行性分析 | 第28-29页 |
| 1.5.1 技术路线 | 第28页 |
| 1.5.2 可行性分析 | 第28-29页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第29-48页 |
| 2.1 实验材料 | 第29-34页 |
| 2.1.1 菌株 | 第29页 |
| 2.1.2 质粒 | 第29-30页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第30-31页 |
| 2.1.4 主要实验仪器 | 第31-32页 |
| 2.1.5 相关溶液及其配制 | 第32-34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-48页 |
| 2.2.1 分子克隆实验操作 | 第35-39页 |
| 2.2.2 转入底物蛋白背景菌 | 第39-40页 |
| 2.2.3 蛋白质表达 | 第40页 |
| 2.2.4 Spot titer | 第40-41页 |
| 2.2.5 目标蛋白的纯化 | 第41-46页 |
| 2.2.6 ULP1蛋白的纯化 | 第46页 |
| 2.2.7 以α-乳清蛋白(α-LA)为底物检测分子伴侣活性 | 第46-48页 |
| 第3章 实验结果与讨论 | 第48-62页 |
| 3.1 Spy L32P,Q100L突变体的构建 | 第48-50页 |
| 3.2 转入底物蛋白背景菌 | 第50-51页 |
| 3.3 Spot titer | 第51-52页 |
| 3.4 构建活性较弱的Spy突变体 | 第52-55页 |
| 3.5 蛋白纯化 | 第55-60页 |
| 3.6 测浓度 | 第60-61页 |
| 3.7 以α-乳清蛋白(α-LA)为底物检测分子伴侣活性 | 第61-62页 |
| 第4章 结论与展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
