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胞壁完整性相关的20个信号转导与效应蛋白的功能分析及其与昆虫病原真菌生防潜能的关系

致谢第7-11页
摘要第11-14页
1 生防真菌胞壁完整性与抗逆性状关联的研究现状第14-26页
    1.1 生防真菌的抗逆生物学第14-16页
    1.2 真菌细胞壁的结构与功能第16-19页
        1.2.1 葡聚糖第17-18页
        1.2.2 几丁质第18页
        1.2.3 胞壁蛋白质第18-19页
    1.3 真菌细胞壁完整性信号通路第19-24页
        1.3.1 CWI信号通路的膜传感器第20-21页
        1.3.2 组成CWI信号通路的MAPK蛋白激酶第21-22页
        1.3.3 CWI信号通路的激活第22-24页
    1.4 展望第24-26页
2 球孢白僵菌细胞壁完整性信号通路级联激酶的功能解析第26-54页
    2.1 材料第27-28页
        2.1.1 菌株及培养条件第27页
        2.1.2 试剂及试剂盒第27-28页
    2.2 方法第28-38页
        2.2.1 DNA 提取第28页
        2.2.2 RNA提取及反转录第28-29页
        2.2.3 Bck1、Mkk1和Slt2的基因克隆与蛋白序列分析第29页
        2.2.4 Bck1、Mkk1和Slt2单基因敲除/回补载体的构建及转化第29-31页
        2.2.5 基因敲除和回补转化子的筛选与鉴定第31-32页
        2.2.6 菌落生长、产孢量及分生孢子活力检测第32-33页
        2.2.7 不同类型的胁迫反应测定第33-34页
        2.2.8 生物测定第34页
        2.2.9 表型相关基因的转录水平测定第34页
        2.2.10 各敲除株胞壁受损程度的检测第34-36页
        2.2.11 胞内甘露醇和海藻糖含量的检测第36-37页
        2.2.12 各敲除株Hog1磷酸化水平的测定第37页
        2.2.13 数据统计与分析第37-38页
    2.3 结果与分析第38-50页
        2.3.1 Bck1、Mkk1和Slt2的基因及其蛋白序列特征第38页
        2.3.2 球孢白僵菌Bck1、Mkk1和Slt2的缺失及回补菌株鉴定第38-40页
        2.3.3 Bck1、Mkk1和Slt2对生长、产孢及孢子活力的调控作用第40-43页
        2.3.4 球孢白僵菌Bck1、Mkk1和Slt2调控细胞壁完整性第43-45页
        2.3.5 球孢白僵菌Bck1、Mkk1和Slt2参与调控高渗反应第45-47页
        2.3.6 Bck1、Mkk1和Slt2参与球孢白僵菌生防潜能的调控第47-49页
        2.3.7 Bck1、Mkk1和Slt2参与调控球孢白僵菌胞内甘露醇和海藻糖的代谢第49-50页
    2.4 讨论第50-54页
3 两种昆虫病原真菌中GPI锚定蛋白Ecm33的功能比较第54-70页
    3.1 材料第55页
        3.1.1 菌株及培养条件第55页
        3.1.2 试剂及试剂盒第55页
    3.2 方法第55-60页
        3.2.1 Bbecm33和Mrecm33的克隆与序列分析第55-56页
        3.2.2 Bbecm33和Mrecm33的转录动态分析第56页
        3.2.3 Bbecm33和Mrecm33的亚细胞定位第56-57页
        3.2.4 Bbecm33和Mrecm33的敲除/回补株构建第57-58页
        3.2.5 菌落生长及产孢量测定第58页
        3.2.6 分生孢子表面糖分子抗原表位变化的测定第58-59页
        3.2.7 分生孢子内甘露醇和海藻糖含量的测定第59页
        3.2.8 各菌株对化学胁迫敏感性的测定第59页
        3.2.9 各菌株生防潜能的测定第59-60页
        3.2.10 数据分析第60页
    3.3 结果与分析第60-66页
        3.3.1 球孢白僵菌和罗伯茨绿僵菌Ecm33同源蛋白的序列特征第60页
        3.3.2 野生株中Bbecm33和Mrecm33的转录特征第60-62页
        3.3.3 Bbecm33和Mrecm33的亚细胞定位第62-63页
        3.3.4 Bbecm33和Mrecm33的缺失对生长和产孢的影响第63-64页
        3.3.5 Bbecm33和Mrecm33影响分生孢子表面组分和孢内物质积累第64页
        3.3.6 Bbecm33和Mrecm33对抗逆性状及毒力的影响第64-66页
    3.4 讨论第66-70页
4 两种昆虫病原真菌中胞壁合成蛋白磷酸酶Ssd1的功能比较第70-84页
    4.1 材料第70-71页
        4.1.1 菌株及培养条件第70页
        4.1.2 试剂及试剂盒第70-71页
    4.2 方法第71-73页
        4.2.1 Bbssd1和Mrssd1基因的克隆与序列分析第71页
        4.2.2 Bbssd1和Mrssd1的胶体金免疫定位第71页
        4.2.3 Bbssd1和Mrssd1的转录动态分析第71页
        4.2.4 Bbssd1和Mrssd1的敲除/回补株构建第71-73页
        4.2.5 表型分析第73页
        4.2.6 胞壁合成相关基因的转录水平分析第73页
        4.2.7 数据统计与分析第73页
    4.3 结果与分析第73-80页
        4.3.1 Bbssd1和Mrssd1的序列结构、基因转录表达和亚细胞定位第73-76页
        4.3.2 Bbssd1和Mrssd1的缺失影响生长、产孢及孢子活力第76-78页
        4.3.3 Bbssd1和Mrssd1的缺失影响抗逆性状和毒力第78-79页
        4.3.4 Bbssd1和Mrssd1的缺失影响分生孢子壁结构和孢内小分子溶质累积第79-80页
    4.4 讨论第80-84页
5 球孢白僵菌13种含WSC结构域蛋白的功能比较第84-104页
    5.1 材料第85页
        5.1.1 菌株和试剂第85页
    5.2 方法第85-90页
        5.2.1 球孢白僵菌WSC蛋白的序列分析第85-86页
        5.2.2 wsc1~13基因的转录动态分析第86页
        5.2.3 wsc1~13的敲除/回补株构建第86-89页
        5.2.4 表型分析第89页
        5.2.5 表型相关基因的转录水平分析第89-90页
    5.3 结果与分析第90-99页
        5.3.1 球孢白僵菌WSC蛋白序列特征及其基因的转录特征第90-93页
        5.3.2 球孢白僵菌WSC结构蛋白的生物学功能第93-97页
        5.3.3 表型相关基因的转录水平变化第97-99页
    5.4 讨论第99-104页
6 结语第104-106页
参考文献第106-118页
Summary第118-120页
附录:攻读博士学位期间的主要成果第121页

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