| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 引言 | 第10-23页 |
| 1.1 牛病毒性腹泻病毒概述 | 第10-18页 |
| 1.1.1 病原学 | 第10-11页 |
| 1.1.2 流行病学 | 第11页 |
| 1.1.3 BVDV 主要结构蛋白及其功能 | 第11-13页 |
| 1.1.4 牛病毒性腹泻病临床类型 | 第13-15页 |
| 1.1.5 诊断检测 | 第15-17页 |
| 1.1.6 BVDV 疫苗研究现状 | 第17-18页 |
| 1.2 嗜酸乳杆菌表达外源抗原的概述 | 第18-21页 |
| 1.2.1 乳酸杆菌受体系统 | 第18-19页 |
| 1.2.2 乳酸菌的益生作用 | 第19-20页 |
| 1.2.3 乳酸杆菌作为抗原表达载体的优势 | 第20页 |
| 1.2.4 乳酸杆菌作为病毒抗原表达及递送系统的前景 | 第20-21页 |
| 1.3 pMG36e 组成型表达载体 | 第21-22页 |
| 1.4 研究目的及意义 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-40页 |
| 2.1 试验材料 | 第23-27页 |
| 2.1.1 毒株、菌种、细胞和质粒 | 第23页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 试验动物 | 第23页 |
| 2.1.4 引物设计与合成 | 第23-24页 |
| 2.1.5 培养基的配制 | 第24页 |
| 2.1.6 溶液的配制 | 第24-25页 |
| 2.1.7 质粒大量提取主要试剂 | 第25页 |
| 2.1.8 聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）主要试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.9 间接 ELISA 检测抗体主要试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.10 主要设备和仪器 | 第27页 |
| 2.2 试验方法 | 第27-40页 |
| 2.2.1 BVDV 分离株 E0 基因的克隆与序列分析 | 第27-32页 |
| 2.2.2 BVDV E0 基因大肠杆菌重组菌株的构建及表达 | 第32-36页 |
| 2.2.3 BVDV E0 基因嗜酸乳杆菌重组菌的构建及表达 | 第36-39页 |
| 2.2.4 BVDV 分离株 E0 基因重组乳酸菌免疫效果的检测 | 第39-40页 |
| 3 试验结果 | 第40-52页 |
| 3.1 BVDV 分离株 E0 基因的克隆与序列分析 | 第40-44页 |
| 3.1.1 E0 目的基因 PCR 扩增结果 | 第40-41页 |
| 3.1.2 扩增片段的克隆及鉴定结果 | 第41页 |
| 3.1.3 扩增片段的序列测定及同源性分析结果 | 第41-43页 |
| 3.1.4 HB-DCZ 株 E0 蛋白的 B 细胞表位预测结果 | 第43-44页 |
| 3.2 BVDV E0 基因大肠杆菌重组菌株的构建及表达 | 第44-47页 |
| 3.2.1 pMG36e-E0 重组表达质粒的鉴定 | 第44-45页 |
| 3.2.2 E0 蛋白质在大肠杆菌中的表达 | 第45-46页 |
| 3.2.3 Western-blotting 分析重组大肠杆菌中 E0 蛋白的表达 | 第46-47页 |
| 3.3 BVDV E0 基因嗜酸乳杆菌重组菌的构建及表达 | 第47-49页 |
| 3.3.1 pMG36e-E0 重组表达质粒的鉴定 | 第47-48页 |
| 3.3.2 E0 蛋白质在嗜酸乳杆菌 LA-5 中的表达 | 第48页 |
| 3.3.3 Western-blotting 分析嗜酸乳杆菌中 E0 的表达 | 第48页 |
| 3.3.4 pMG36e-E0 质粒在嗜酸乳杆菌表达系统的稳定性 | 第48-49页 |
| 3.4 BVDV 分离株 E0 基因重组乳酸菌免疫效果的检测 | 第49-52页 |
| 3.4.1 小鼠粪便中特异性 sIgA 变化趋势的检测结果 | 第49-50页 |
| 3.4.2 小鼠血清中特异性 IgG 抗体检测结果 | 第50-51页 |
| 3.4.3 免疫保护性实验 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-55页 |
| 5 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 附录 | 第62-65页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第65-67页 |
| 作者简历 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
