| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第13-23页 |
| 1.1 甾体药物概述 | 第13-15页 |
| 1.1.1 甾体化合物的结构 | 第13页 |
| 1.1.2 甾体化合物的应用 | 第13-15页 |
| 1.2 甾体药物的生产方式 | 第15-19页 |
| 1.2.1 甾体药物的化学合成 | 第15-16页 |
| 1.2.2 微生物转化生产甾体药物 | 第16-19页 |
| 1.2.2.1 微生物生产甾体药物的转化类型 | 第16-17页 |
| 1.2.2.2 微生物转化的羟基化反应 | 第17-19页 |
| 1.3 甾体微生物11位羟基化的研究方法 | 第19-20页 |
| 1.3.1 底物传质方面的研究 | 第19页 |
| 1.3.2 培养条件方面的优化 | 第19-20页 |
| 1.3.3 转化体系方面的研究 | 第20页 |
| 1.3.3.1 油水相系统 | 第20页 |
| 1.3.3.2 双水相系统 | 第20页 |
| 1.3.3.3 浊点系统 | 第20页 |
| 1.4 17α-羟基黄体酮的11α羟基化的研究 | 第20-21页 |
| 1.5 本课题的立体依据和研究内容 | 第21-23页 |
| 1.5.1 立体依据 | 第21-22页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第22-23页 |
| 1.5.2.1 菌种的筛选 | 第22页 |
| 1.5.2.2 17α-羟基黄体酮的转化工艺研究 | 第22页 |
| 1.5.2.3 底物预处理工艺研究 | 第22页 |
| 1.5.2.4 5L发酵罐转化工艺研究 | 第22-23页 |
| 第2章 赭曲霉生物催化17α-羟基黄体酮11α羟基化转化体系的优化 | 第23-42页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第23-24页 |
| 2.2.1 菌株 | 第23页 |
| 2.2.2 主要仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第24页 |
| 2.2.4 培养基组成 | 第24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-27页 |
| 2.3.1 菌种培养 | 第24-25页 |
| 2.3.2 菌种的筛选 | 第25页 |
| 2.3.3 种子培养初始pH值的选择 | 第25页 |
| 2.3.4 葡萄糖浓度标准曲线和赭曲霉生长曲线的测定 | 第25页 |
| 2.3.5 生物转化最适pH值的选择 | 第25页 |
| 2.3.6 17α-羟基黄体酮11位羟基化的转化培养基的优化 | 第25-26页 |
| 2.3.7 17α-羟基黄体酮11位羟基化的转化条件的优化 | 第26页 |
| 2.3.8 17α-羟基黄体酮的投料时的处理方式 | 第26页 |
| 2.3.9 分析方法 | 第26-27页 |
| 2.3.9.1 薄层层析(TLC)分析法 | 第26页 |
| 2.3.9.2 马尔文粒度仪测粒径法 | 第26-27页 |
| 2.3.9.3 高效液相色谱(HPLC)分析法 | 第27页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第27-40页 |
| 2.4.1 赭曲霉菌种的筛选 | 第27-28页 |
| 2.4.2 转化产物的HPLC验证 | 第28-29页 |
| 2.4.3 种子培养基的初始pH调整 | 第29页 |
| 2.4.4 赭曲霉生长曲线的测定 | 第29-30页 |
| 2.4.5 葡萄糖含量标准曲线的测定 | 第30-31页 |
| 2.4.6 生物转化期间在转化培养基中最适pH值 | 第31页 |
| 2.4.7 17α-羟基黄体酮11位羟基化的转化培养基的优化 | 第31-35页 |
| 2.4.7.1 转化培养基中碳氮比值的确定 | 第31-32页 |
| 2.4.7.2 转化培养基中甲壳素的加量 | 第32页 |
| 2.4.7.3 转化培养基中最适初始pH值的确定 | 第32-33页 |
| 2.4.7.4 转化培养基磷酸盐的类别的选择及其加量 | 第33-35页 |
| 2.4.8 17α-羟基黄体酮11位羟基化的转化条件的优化 | 第35-38页 |
| 2.4.8.1 赭曲霉接种量的确定 | 第35-36页 |
| 2.4.8.2 恒温培养摇床转速的确定 | 第36页 |
| 2.4.8.3 17α-羟基黄体酮投料时间的确定 | 第36-37页 |
| 2.4.8.4 转化培养过程中补加糖的类别的确定 | 第37-38页 |
| 2.4.9 17α-羟基黄体酮投料时的预处理 | 第38-40页 |
| 2.4.9.1 底物17α-羟基黄体酮粒径大小的选择 | 第38-40页 |
| 2.4.9.2 底物投料方式的选择 | 第40页 |
| 2.5 本章小结 | 第40-42页 |
| 第3章 有机溶剂和表面活性剂在转化体系的应用研究 | 第42-53页 |
| 3.1 引言 | 第42页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第42页 |
| 3.2.1 实验菌种 | 第42页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第42页 |
| 3.2.3 实验试剂 | 第42页 |
| 3.2.4 培养基组成 | 第42页 |
| 3.3 实验方法 | 第42-44页 |
| 3.3.1 蛋白质含量的测定 | 第42页 |
| 3.3.2 不同有机溶剂对转化的影响 | 第42页 |
| 3.3.3 不同有机溶剂对底物溶解度的测定 | 第42-43页 |
| 3.3.4 不同含量DMSO对于转化的影响 | 第43页 |
| 3.3.5 添加不同浓度DMSO对于菌体的影响 | 第43页 |
| 3.3.5.1 不同含量DMSO对于菌体蛋白质的泄漏量的影响 | 第43页 |
| 3.3.5.2 不同含量DMSO对于菌体形态的影响 | 第43页 |
| 3.3.5.3 不同含量DMSO对于菌体生长干重的影响 | 第43页 |
| 3.3.6 表面活性剂的选择 | 第43页 |
| 3.3.7 有机溶剂和表面活性剂的复配 | 第43页 |
| 3.3.7.1 DMSO和表面活性剂的复配对转化的影响 | 第43页 |
| 3.3.7.2 丙二醇和表面活性剂的复配对转化的影响 | 第43页 |
| 3.3.8 加DMSO复配增溶体系下补糖时间的调整对于转化的影响 | 第43-44页 |
| 3.3.9 分析方法 | 第44页 |
| 3.3.9.1 液相检测 | 第44页 |
| 3.3.9.2 扫描电镜(SEM)微生物样品的制备 | 第44页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第44-52页 |
| 3.4.1 蛋白质含量标准曲线 | 第44-45页 |
| 3.4.2 不同有机溶剂种类对转化的影响 | 第45-46页 |
| 3.4.3 不同表面活性剂对转化的影响 | 第46-47页 |
| 3.4.4 DMSO和表面活性剂的复配对转化的影响 | 第47页 |
| 3.4.5 丙二醇和表面活性剂的复配对转化的影响 | 第47-48页 |
| 3.4.6 添加不同量DMSO复配体系对底物的转化的影响 | 第48-49页 |
| 3.4.7 加DMSO转化体系中补糖时间的选择对转化的影响 | 第49-50页 |
| 3.4.8 DMSO对于赭曲霉菌体的影响 | 第50-52页 |
| 3.4.8.1 DMSO对赭曲霉生长干重的影响 | 第50页 |
| 3.4.8.2 DMSO对赭曲霉胞内蛋白质渗出量的影响 | 第50-51页 |
| 3.4.8.3 DMSO对赭曲霉菌体形态的影响 | 第51-52页 |
| 3.5 本章小结 | 第52-53页 |
| 第4章 包埋材料在转化体系中的初步研究 | 第53-64页 |
| 4.1 引言 | 第53-54页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第54页 |
| 4.2.1 实验菌种 | 第54页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第54页 |
| 4.2.3 实验试剂 | 第54页 |
| 4.2.4 培养基组成 | 第54页 |
| 4.3 实验方法 | 第54-55页 |
| 4.3.1 凹凸棒石粒径及其添加量对转化的影响 | 第54页 |
| 4.3.2 200目凹凸棒石添加量对转化的影响 | 第54页 |
| 4.3.3 200目凹凸棒石对赭曲霉菌体生物量的影响 | 第54-55页 |
| 4.3.4 多孔淀粉添加含量及其添加方式的研究 | 第55页 |
| 4.3.5 分析方法 | 第55页 |
| 4.3.5.1 液相分析 | 第55页 |
| 4.3.5.2 SEM分析添加包埋物赭曲霉菌体形态的影响 | 第55页 |
| 4.3.5.3 TGA分析添加包埋物对底物17α-羟基黄体酮的包埋率 | 第55页 |
| 4.3.5.4 FTIR分析凹凸棒石包埋底物的结合方式 | 第55页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第55-63页 |
| 4.4.1 凹凸棒石粒径及其添加量的选择 | 第55-56页 |
| 4.4.2 200目凹凸棒石添加的确定 | 第56-57页 |
| 4.4.3 关于200目的凹凸棒石对底物转化提高的机理探究 | 第57-59页 |
| 4.4.3.1 200目凹凸棒石对赭曲霉菌体生物量的影响 | 第57页 |
| 4.4.3.2 SEM分析200目的凹凸棒石对赭曲霉菌体的影响 | 第57-58页 |
| 4.4.3.3 TGA分析200目的凹凸棒石对底物17α-羟基黄体酮的包埋率 | 第58-59页 |
| 4.4.3.4 FTIR分析200目的凹凸棒石包埋底物 | 第59页 |
| 4.4.4 多孔淀粉的添加量及其添加方式 | 第59-60页 |
| 4.4.5 多孔淀粉和普通淀粉的对照转化实验 | 第60-61页 |
| 4.4.6 TGA分析多孔淀粉对底物17α-羟基黄体酮的包埋率 | 第61-62页 |
| 4.4.7 FTIR分析多孔淀粉包埋底物 | 第62-63页 |
| 4.5 本章小结 | 第63-64页 |
| 第5章 5L发酵罐转化实验 | 第64-68页 |
| 5.1 引言 | 第64页 |
| 5.2 实验材料和设备 | 第64页 |
| 5.2.1 实验菌种 | 第64页 |
| 5.2.2 实验试剂 | 第64页 |
| 5.2.3 实验仪器 | 第64页 |
| 5.2.4 培养基组成 | 第64页 |
| 5.3 实验方法 | 第64-65页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第65-67页 |
| 5.4.1 根据优化后的培养基及转化工艺进行中5L转化实验结果 | 第65-66页 |
| 5.4.2 在发酵培养基中添加DMSO和吐温80进行转化的结果 | 第66-67页 |
| 5.5 本章小结 | 第67-68页 |
| 第6章 主要结论 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 攻读学位期间所开展的科研项目和发表的学术论文 | 第74页 |
