| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-15页 |
| ·MGC5306 的研究进展 | 第10-14页 |
| ·MGC5306 的细胞定位 | 第10页 |
| ·MGC5306 的基因结构 | 第10-11页 |
| ·MGC5306 与其他蛋白的相互作用 | 第11-12页 |
| ·MGC5306 的生物学功能 | 第12页 |
| ·MGC5306 在肿瘤发生中的潜在作用 | 第12-14页 |
| ·抗体制备的研究概况 | 第14页 |
| ·本研究目的与意义 | 第14-15页 |
| 第二章 MGC5306 蛋白原核表达载体的构建、表达及纯化 | 第15-32页 |
| ·实验材料 | 第15页 |
| ·实验试剂 | 第15-17页 |
| ·有关原核表达载体的构建 | 第15-16页 |
| ·有关蛋白表达与纯化 | 第16-17页 |
| ·实验仪器 | 第17-18页 |
| ·实验方法 | 第18-25页 |
| ·引物的设计与合成 | 第18页 |
| ·通过PCR 扩增引物 | 第18页 |
| ·凝胶中回收质粒pEGFP-N1-MGC5306 的PCR 产物 | 第18-19页 |
| ·酶切质粒pEGFP-N1-MGC5306 的PCR 回收产物 | 第19页 |
| ·酶切载体质粒pGEX-4T-1 (+) | 第19-20页 |
| ·DNA 快速纯化回收试剂盒从溶液中回收酶切产物 | 第20页 |
| ·酶切后PCR 产物与pGEX-4T-1 (+)载体连接 | 第20页 |
| ·CaCl 2 法制备感受态细胞（DH5α） | 第20-21页 |
| ·转化 | 第21页 |
| ·抽提重组质粒pGEX-4T-1-MGC5306 | 第21页 |
| ·重组质粒pGEX-4T-1-MGC5306 酶切鉴定 | 第21-22页 |
| ·表达条件的优化和目的基因的原核表达 | 第22-23页 |
| ·菌体表达总蛋白的Western Blot 分析 | 第23页 |
| ·验证表达蛋白是否为可溶性蛋白 | 第23-24页 |
| ·融合蛋白的大量制备及纯化 | 第24-25页 |
| ·结果与分析 | 第25-29页 |
| ·MGC5306（98-204AA）基因的扩增 | 第25页 |
| ·pGEX-4T-1-MGC5306 原核表达载体的构建与鉴定 | 第25-27页 |
| ·表达蛋白是否为可溶性蛋白的验证 | 第27-28页 |
| ·在不同的温度下IPTG 诱导重组质粒pGEX-4T-1-MGC5306 | 第28页 |
| ·不同IPTG 浓度下诱导重组质粒pGEX-4T-1-MGC5306 | 第28-29页 |
| ·重组质粒pGEX-4T-1-MGC5306 在大肠杆菌E.coli.BL21(DE3) plysS 中的诱导表达和纯化 | 第29页 |
| ·讨论 | 第29-31页 |
| ·有关MGC5306 基因的PCR 扩增与载体的选择 | 第29-30页 |
| ·有关目的蛋白的诱导表达和纯化 | 第30-31页 |
| ·结论 | 第31-32页 |
| 第三章 MGC5306 蛋白多克隆抗体制备及鉴定 | 第32-38页 |
| ·材料和试剂 | 第32-33页 |
| ·实验仪器 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-34页 |
| ·兔抗MGC5306 蛋白多克隆抗体的制备 | 第33页 |
| ·用ELISA 方法来检测抗血清的效价 | 第33-34页 |
| ·对抗血清进行纯化 | 第34页 |
| ·原核表达蛋白的Western Blotting 检测 | 第34页 |
| ·结果与分析 | 第34-36页 |
| ·Western Blot 方法检测多克隆抗体 | 第34-35页 |
| ·用ELISA 方法来检测抗体的效价 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36-37页 |
| ·有关多克隆抗体的制备和提高抗血清效价的方法 | 第36-37页 |
| ·关于ELISA 实验 | 第37页 |
| ·有关多克隆抗体的鉴定和Western blot 检测 | 第37页 |
| ·结论 | 第37-38页 |
| 第四章 MGC5306 蛋白真核表达载体的构建及亚细胞结构的定位 | 第38-44页 |
| ·材料 | 第38页 |
| ·试剂和仪器 | 第38-39页 |
| ·有关真核表达载体构建 | 第38页 |
| ·亚细胞结构定位方面 | 第38-39页 |
| ·方法 | 第39-41页 |
| ·真核表达载体pDsRED-C1-MGC5306 的构建 | 第39页 |
| ·对Hela 细胞进行传代培养 | 第39-40页 |
| ·Hela 细胞的脂质体瞬时转染（24 孔板/6 孔板） | 第40页 |
| ·MGC5306 蛋白的亚细胞结构定位 | 第40-41页 |
| ·结果与分析 | 第41-42页 |
| ·真核表达载体pDsRed-C1-MGC5306 构建示意图 | 第41页 |
| ·真核表达载体pDsRED-C1-MGC5306 的构建及鉴定 | 第41-42页 |
| ·MGC5306 蛋白在Hela 细胞中的亚细胞结构定位 | 第42页 |
| ·讨论 | 第42-43页 |
| ·结论 | 第43-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 附图 | 第49-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 作者简介 | 第52页 |
