| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-12页 |
| 第一章 趋化因子研究进展 | 第12-23页 |
| ·趋化因子概述 | 第12-13页 |
| ·淋巴细胞趋化因子(Lptn)研究进展 | 第13-23页 |
| ·Lptn 结构特点 | 第13-14页 |
| ·Lptn 表达及调节 | 第14-15页 |
| ·Lptn 受体研究 | 第15页 |
| ·Lptn 功能 | 第15-23页 |
| 第二章 猪淋巴细胞趋化因子克隆、分析及原核表达 | 第23-43页 |
| ·材料 | 第23-26页 |
| ·组织来源 | 第23页 |
| ·主要试剂和工具酶 | 第23页 |
| ·菌株及载体 | 第23页 |
| ·主要仪器与设备 | 第23-24页 |
| ·试剂及溶液的配制 | 第24-26页 |
| ·方法 | 第26-33页 |
| ·RNA 提取 | 第26页 |
| ·RT-PCR | 第26-27页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第27-28页 |
| ·PLptn 及△PLptn 基因亚克隆载体的构建与鉴定 | 第28-30页 |
| ·PLptn 及△PLptn 基因测序结果及序列分析 | 第30页 |
| ·PLptn 及△PLptn 原核表达载体构建与鉴定 | 第30-31页 |
| ·原核表达载体在大肠杆菌中的表达 | 第31-32页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 检测 | 第32-33页 |
| ·结果与分析 | 第33-40页 |
| ·总RNA 浓度和纯度 | 第33页 |
| ·PLptn 及△PLptn 基因的PCR 扩增 | 第33-34页 |
| ·PLptn 及△PLptn 基因的二次PCR 扩增 | 第34-35页 |
| ·重组质粒pMD18T-PLptn 及pMD18T-△PLptn 的酶切鉴定 | 第35-36页 |
| ·目的基因的测序结果及分析 | 第36-38页 |
| ·重组质粒pET32a-PLptn 及pET32a-△PLptn 酶切鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组质粒pET32a-PLptn 及pET32a-△PLptn 原核表达产物的 SDS-PAGE 检测 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| ·结论 | 第41-43页 |
| 第三章 猪淋巴细胞趋化因子在哺乳细胞中的表达 | 第43-57页 |
| ·材料 | 第43-45页 |
| ·主要试剂及来源 | 第43页 |
| ·质粒与菌株 | 第43页 |
| ·主要仪器与设备 | 第43-44页 |
| ·细胞培养所用试剂配制 | 第44页 |
| ·D-Hanks 及细胞消化试剂的配制 | 第44页 |
| ·蛋白转移buffer 及TBS 配制 | 第44-45页 |
| ·方法 | 第45-51页 |
| ·PLptn 重组克隆载体的构建 | 第45-46页 |
| ·PLptn 重组表达载体的构建 | 第46-47页 |
| ·PLptn 重组表达载体pEGFP-PLptn 质粒的大量提取和纯化 | 第47-48页 |
| ·pEGFP-PLptn 质粒及pEGFP-C1 质粒转染猪血管内皮细胞(SUVEC) | 第48-49页 |
| ·转染后阳性细胞的鉴定 | 第49页 |
| ·PLptn 目的蛋白的Western blot 检测 | 第49-51页 |
| ·结果与分析 | 第51-54页 |
| ·PCR 产物的电泳结果 | 第51页 |
| ·PLptn 基因重组克隆载体质粒的酶切结果 | 第51-52页 |
| ·PLptn 基因测序结果 | 第52页 |
| ·PLptn 基因重组真核表达载体pEGFP- PLptn 的酶切结果 | 第52-53页 |
| ·重组表达质粒pEGFP-PLptn 及pEGFP-C1 质粒的浓度纯度 | 第53页 |
| ·pEGFP-PLptn 及pEGFP-C1 转染SUVEC 结果 | 第53页 |
| ·阳性细胞克隆的PCR 鉴定 | 第53-54页 |
| ·PLptn 蛋白在SUVEC 中表达的检测 | 第54页 |
| ·讨论 | 第54-56页 |
| ·小结 | 第56-57页 |
| 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 附录 | 第64-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 作者简介 | 第74页 |
