| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩写词(Abbreviation) | 第8-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-25页 |
| 1 黄花蒿青蒿素抗疟疾研究进展 | 第15-20页 |
| 1.1 黄花蒿 | 第15-16页 |
| 1.2 青蒿素抗疟疾作用 | 第16-17页 |
| 1.2.1 青蒿素抗疟疾机制 | 第17页 |
| 1.3 青蒿素其他作用 | 第17-18页 |
| 1.4 青蒿素的耐药性 | 第18-20页 |
| 2 黄花蒿黄酮类化合物研究进展 | 第20-24页 |
| 2.1 黄花蒿黄酮类化合物及其生物活性 | 第20-21页 |
| 2.2 黄花蒿黄酮类化合物协同青蒿素抗疟疾作用 | 第21-22页 |
| 2.3 黄花蒿黄酮类化合物的生物合成 | 第22-24页 |
| 2.3.1 黄烷酮3-羟化酶基因(F3H) | 第22-23页 |
| 2.3.2 黄酮醇合酶基因(FLS) | 第23-24页 |
| 3 研究目的与意义 | 第24页 |
| 4 研究内容 | 第24-25页 |
| 第二章 黄花蒿黄烷酮3-羟化酶(AaF3H)基因克隆及原核表达 | 第25-37页 |
| 1 材料与方法 | 第25-31页 |
| 1.1 材料 | 第25-27页 |
| 1.1.1 黄花蒿原料 | 第25页 |
| 1.1.2 主要仪器设备 | 第25-26页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第26页 |
| 1.1.4 溶液配制 | 第26-27页 |
| 1.2 方法 | 第27-31页 |
| 1.2.1 黄花蒿RNA的提取 | 第27页 |
| 1.2.2 黄花蒿RNA逆转录 | 第27-28页 |
| 1.2.3 AaF3H基因克隆 | 第28页 |
| 1.2.4 AaF3H基因原核表达 | 第28-30页 |
| 1.2.5 AaF3H重组蛋白分离纯化及浓缩 | 第30-31页 |
| 1.2.6 AaF3H基因的核苷酸和氨基酸序列分析 | 第31页 |
| 2 结果与分析 | 第31-37页 |
| 2.1 黄花蒿RNA提取 | 第31页 |
| 2.2 AaF3H基因的PCR克隆 | 第31-32页 |
| 2.3 AaF3H基因原核表达 | 第32-34页 |
| 2.3.1 AaF3H-T重组质粒菌落PCR检测 | 第32页 |
| 2.3.2 AaF3H-T重组质粒双酶切 | 第32-33页 |
| 2.3.3 AaF3H-pET28a重组质粒转化DH5α菌落PCR检测 | 第33页 |
| 2.3.4 转化了AaF3H-pET28a重组质粒的BL21诱导表达体系SDS-PAGE检测 | 第33-34页 |
| 2.4 AaF3H重组蛋白分离纯化及浓缩 | 第34-35页 |
| 2.5 AaF3H基因的核苷酸和氨基酸序列分析 | 第35页 |
| 2.6 小结 | 第35-36页 |
| 2.7 讨论 | 第36-37页 |
| 第三章 黄花蒿黄烷酮3-羟化酶(AaF3H)功能鉴定 | 第37-41页 |
| 1 材料与方法 | 第37-38页 |
| 1.1 材料 | 第37页 |
| 1.1.1 酶原料 | 第37页 |
| 1.1.2 主要仪器设备 | 第37页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第37页 |
| 1.2 方法 | 第37-38页 |
| 1.2.1 AaF3H酶促反应体系 | 第37-38页 |
| 1.2.2 柚皮素及反应产物液相检测 | 第38页 |
| 1.2.3 AaF3H酶反应的最适pH实验 | 第38页 |
| 1.2.4 AaF3H酶反应的最适温度实验 | 第38页 |
| 1.2.5 AaF3H酶的Km米氏常数测定 | 第38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-41页 |
| 2.1 AaF3H酶促反应 | 第38-39页 |
| 2.2 AaF3H酶反应的最适pH | 第39页 |
| 2.3 AaF3H酶反应的最适温度 | 第39-40页 |
| 2.4 小结 | 第40页 |
| 2.5 讨论 | 第40-41页 |
| 第四章 黄花蒿黄酮醇合酶(AaFLS)基因克隆及原核表达 | 第41-47页 |
| 1 材料与方法 | 第41-42页 |
| 1.1 材料 | 第41页 |
| 1.2 方法 | 第41-42页 |
| 1.2.1 AaFLS基因克隆 | 第41页 |
| 1.2.2 AaFLS基因原核表达 | 第41页 |
| 1.2.3 AaFLS重组蛋白分离纯化及浓缩 | 第41-42页 |
| 1.2.4 AaFLS基因的核苷酸和氨基酸序列分析 | 第42页 |
| 2 结果与分析 | 第42-47页 |
| 2.1 AaFLS基因的PCR克隆 | 第42页 |
| 2.2 AaFLS基因原核表达 | 第42-45页 |
| 2.2.1 AaFLS-T重组质粒菌落PCR检测 | 第42-43页 |
| 2.2.2 AaFLS-T重组质粒双酶切 | 第43页 |
| 2.2.3 AaFLS-pET28a重组质粒转化DH5α菌落PCR检测 | 第43-44页 |
| 2.2.4 转化了AaFLS-pET28a重组质粒的BL21诱导表达体系SDS-PAGE检测 | 第44-45页 |
| 2.3 AaFLS重组蛋白分离纯化及浓缩 | 第45页 |
| 2.4 AaFLS基因的核苷酸和氨基酸序列分析 | 第45页 |
| 2.5 小结 | 第45-46页 |
| 2.6 讨论 | 第46-47页 |
| 第五章 黄花蒿黄酮醇合酶(AaFLS)酶的功能验证 | 第47-51页 |
| 1 材料与方法 | 第47-48页 |
| 1.1 材料 | 第47页 |
| 1.1.1 酶原料 | 第47页 |
| 1.1.2 主要仪器设备 | 第47页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第47页 |
| 1.2 方法 | 第47-48页 |
| 1.2.0 AaFLS酶促反应体系底物制备 | 第47页 |
| 1.2.1 AaFLS酶促反应体系 | 第47-48页 |
| 1.2.2 二氢山奈酚及反应产物液相检测 | 第48页 |
| 1.2.3 AaFLS酶促反应的最适pH实验 | 第48页 |
| 1.2.4 AaFLS酶促反应的最适温度实验 | 第48页 |
| 1.2.5 AaFLS酶的Km米氏常数测定 | 第48页 |
| 2 结果与分析 | 第48-51页 |
| 2.1 AaFLS酶促反应 | 第48-49页 |
| 2.2 AaFLS酶反应的最适pH | 第49页 |
| 2.3 AaFLS酶反应的最适温度 | 第49-50页 |
| 2.4 小结 | 第50页 |
| 2.5 讨论 | 第50-51页 |
| 第六章 研究结论,创新点及展望 | 第51-53页 |
| 6.1 研究结论 | 第51-52页 |
| 6.1.1 从黄花蒿cDNA中克隆了两个黄酮类化合物生物合成相关的(AaF3H和AaFLS)基因 | 第51页 |
| 6.1.2 以原核表达方式在大肠杆菌E.Coli BL21(DE3)中表达了黄酮类化合物生物合成关键酶(AaF3H和AaFLS)并通过酶促活性反应对其功能进行了鉴定 | 第51-52页 |
| 6.2 创新点 | 第52页 |
| 6.3 研究展望 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 作者简介 | 第64-65页 |
