| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 主要英文缩略表 | 第14-15页 |
| 第一章 前言 | 第15-27页 |
| 1.1 禽白血病病毒研究进展 | 第15-17页 |
| 1.1.1 禽白血病病毒的病毒结构特性 | 第15页 |
| 1.1.2 禽白血病的诊断技术 | 第15-16页 |
| 1.1.3 禽白血病的防控 | 第16-17页 |
| 1.2 RNAi的研究进展 | 第17-26页 |
| 1.2.1 RNAi的发现及发展 | 第17-18页 |
| 1.2.2 RNAi的作用机制 | 第18-19页 |
| 1.2.3 RNAi在抗病毒治疗中的应用 | 第19-22页 |
| 1.2.4 腺病毒载体研究进展 | 第22-24页 |
| 1.2.5 禽白血病病毒RNAi研究进展 | 第24-25页 |
| 1.2.6 RNAi技术的展望 | 第25-26页 |
| 1.3 本课题研究的目的和意义 | 第26-27页 |
| 第二章 ALV PR/RT/IN/gp85/gp37基因实时荧光定量PCR检测方法的建立 | 第27-43页 |
| 2.1 试验材料 | 第27-28页 |
| 2.1.1 病毒和细胞 | 第27-28页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第28页 |
| 2.1.3 载体和感受态细胞 | 第28页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第28页 |
| 2.2 方法 | 第28-33页 |
| 2.2.1 引物设计与合成 | 第28-29页 |
| 2.2.2 病毒、细胞总RNA提取 | 第29-30页 |
| 2.2.3 反转录 | 第30页 |
| 2.2.4 PCR扩增ALV PR/RT/IN/gp85和gp37基因和内参GAPDH | 第30-31页 |
| 2.2.5 荧光定量PCR标准品质粒的制备 | 第31页 |
| 2.2.6 实时荧光定量PCR | 第31-32页 |
| 2.2.7 实时荧光定量PCR的特异性试验 | 第32页 |
| 2.2.8 实时荧光定量PCR的敏感性试验 | 第32页 |
| 2.2.9 实时荧光定量PCR的重复性试验 | 第32-33页 |
| 2.3 结果 | 第33-42页 |
| 2.3.1 ALV PR/RT/IN/gp85/gp37的PCR扩增结果 | 第33页 |
| 2.3.2 标准品质粒的鉴定结果 | 第33页 |
| 2.3.3 标准品质粒的Real-time PCR扩增及标准曲线的建立 | 第33-37页 |
| 2.3.4 实时荧光定量PCR熔解曲线分析 | 第37-38页 |
| 2.3.5 实时荧光定量PCR特异性试验结果 | 第38-39页 |
| 2.3.6 实时荧光定量PCR敏感性试验结果 | 第39页 |
| 2.3.7 实时荧光定量PCR重复性试验结果 | 第39-42页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第42-43页 |
| 第三章 腺病毒载体介导的RNAi抑制ALV-J在DF-1细胞上复制情况调查 | 第43-61页 |
| 3.1 试验材料 | 第44-45页 |
| 3.1.1 腺病毒载体构建相关试剂 | 第44页 |
| 3.1.2 IFA相关试剂 | 第44页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第44-45页 |
| 3.2 方法 | 第45-51页 |
| 3.2.1 siRNA序列的设计 | 第45-46页 |
| 3.2.2 重组腺病毒载体的构建 | 第46-47页 |
| 3.2.3 重组腺病毒的包装、扩增和纯化 | 第47-49页 |
| 3.2.4 重组腺病毒感染DF-1细胞最佳MOI的测定 | 第49-50页 |
| 3.2.5 间接免疫荧光法(IFA)对ALV-J病毒滴度(TCID_(50))的测定 | 第50页 |
| 3.2.6 Real-time PCR检测PR/RT/IN/gp85/gp37基因mRNA转录水平 | 第50-51页 |
| 3.2.7 IFA检测重组腺病毒RNA干扰HG03囊膜蛋白的表达水平 | 第51页 |
| 3.2.8 统计学分析 | 第51页 |
| 3.3 试验结果 | 第51-58页 |
| 3.3.1 腺病毒载体pHBAd-U6-RFP的酶切鉴定及测序验证 | 第51-52页 |
| 3.3.2 重组腺病毒的滴度鉴定 | 第52-53页 |
| 3.3.3 重组腺病毒感染DF-1细胞最佳MO1的测定 | 第53-54页 |
| 3.3.4 IFA对ALV-J HG03病毒滴度测定结果 | 第54-55页 |
| 3.3.5 Real-time PCR检测PR/RT/IN/gp85/gp37基因mRNA转录水平 | 第55-57页 |
| 3.3.6 IFA检测重组腺病毒干扰HG03的复制 | 第57-58页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第58-61页 |
| 第四章 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 个人简历 | 第69页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第69页 |
