| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7页 |
| 第1章 前言 | 第12-30页 |
| 1.1 深黄被孢霉 | 第12-13页 |
| 1.2 低温对微生物的影响 | 第13-14页 |
| 1.3 微生物的低温适应机制 | 第14-18页 |
| 1.3.1 微生物膜蛋白和脂多糖的磷酸化和去磷酸化感应机制 | 第14页 |
| 1.3.2 多不饱和脂肪酸合成的低温调节机制 | 第14-15页 |
| 1.3.3 细胞膜流动性的维持 | 第15页 |
| 1.3.4 低温酶的存在 | 第15-16页 |
| 1.3.5 较强的蛋白质合成能力 | 第16-17页 |
| 1.3.6 冷休克蛋白的超量表达 | 第17页 |
| 1.3.7 低温保护 | 第17-18页 |
| 1.4 分离差异表达基因的技术 | 第18-22页 |
| 1.4.1 mRNA差异显示技术的基本原理 | 第19-20页 |
| 1.4.2 差异显示技术的优缺点及其改进 | 第20-22页 |
| 1.5 其它分离差异表达因的技术 | 第22-26页 |
| 1.5.1 代表性差异显示分析技术 | 第23-24页 |
| 1.5.2 抑制性扣除杂交 | 第24页 |
| 1.5.3 基因表达系列分析技术 | 第24-25页 |
| 1.5.4 cDNA微阵列 | 第25-26页 |
| 1.6 DDRT-PCR研究环境胁迫下微生物基因的差异表达 | 第26-27页 |
| 1.7 本研究的目的、意义和技术路线 | 第27-30页 |
| 第2章 材料和方法 | 第30-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第30-33页 |
| 2.1.1 菌株 | 第30页 |
| 2.1.2 培养基 | 第30页 |
| 2.1.3 实验药品 | 第30-31页 |
| 2.1.4 总RNA提取及纯化试剂 | 第31页 |
| 2.1.5 反转录及PCR相关试剂 | 第31页 |
| 2.1.6 核酸电泳试剂及硝酸银染料 | 第31-32页 |
| 2.1.7 克隆试剂 | 第32-33页 |
| 2.1.8 实时荧光定量PCR试剂 | 第33页 |
| 2.2 实验仪器 | 第33页 |
| 2.3 实验方法 | 第33-42页 |
| 2.3.1 深黄被孢霉丝体的培养 | 第34页 |
| 2.3.2 总RNA的提取 | 第34-35页 |
| 2.3.3 检测总RNA的完整性及浓度 | 第35页 |
| 2.3.4 反转录 | 第35页 |
| 2.3.5 PCR扩增 | 第35-36页 |
| 2.3.6 聚丙烯酰胺凝胶电泳及硝酸银染色 | 第36-37页 |
| 2.3.7 差异条带的回收纯化 | 第37页 |
| 2.3.8 差异条带的二次扩增与纯化 | 第37-38页 |
| 2.3.9 差异片断的克隆 | 第38-40页 |
| 2.3.10 差异片断的测序 | 第40页 |
| 2.3.11 序列分析 | 第40页 |
| 2.3.12 实时荧光定量PCR验证差异序列特异性 | 第40-42页 |
| 第三章 结果与分析 | 第42-52页 |
| 3.1 RNA提取效果 | 第42-43页 |
| 3.2 差异显示结果 | 第43-44页 |
| 3.3 差异条带二次扩增结果 | 第44-46页 |
| 3.4 差异片段克隆结果 | 第46-47页 |
| 3.5 序列结果及同源性比对结果 | 第47-49页 |
| 3.6 荧光定量PCR验证结果 | 第49-52页 |
| 第四章 讨论 | 第52-70页 |
| 4.1 实验材料的选择 | 第52页 |
| 4.2 RNA提取 | 第52-53页 |
| 4.3 DDRT-PCR方法的选择 | 第53-54页 |
| 4.4 差异显示凝胶的选择 | 第54页 |
| 4.5 聚丙烯酰胺电泳及硝酸银染色 | 第54-55页 |
| 4.6 差异条带的回收 | 第55页 |
| 4.7 荧光定量PCR验证 | 第55-56页 |
| 4.8 序列同源性比对结果的讨论 | 第56-70页 |
| 4.8.1 序列结果的讨论 | 第56-57页 |
| 4.8.2 同源性比对结果讨论 | 第57-70页 |
| 第五章 总结与展望 | 第70-72页 |
| 5.1 总结 | 第70-71页 |
| 5.2 展望 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 附录: SEQ1-21差异显示片段序列 | 第79-90页 |
| 发表论文情况 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
