| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第10-27页 |
| 1.1 燃料乙醇 | 第10-13页 |
| 1.1.1 国内生物乙醇的发展情况 | 第11-12页 |
| 1.1.2 国外生物乙醇的发展情况与消费现状 | 第12-13页 |
| 1.2 木质纤维素 | 第13-14页 |
| 1.3 木质纤维素生产燃料乙醇过程 | 第14-15页 |
| 1.3.1 预处理 | 第14-15页 |
| 1.3.2 水解纤维素 | 第15页 |
| 1.3.3 发酵生产乙醇 | 第15页 |
| 1.4 纤维素酶的研究进展 | 第15-21页 |
| 1.4.1 纤维素酶的来源 | 第15-16页 |
| 1.4.2 纤维素酶的分类及命名 | 第16-18页 |
| 1.4.3 纤维素酶的分子结构 | 第18-20页 |
| 1.4.4 纤维素酶的作用机理 | 第20-21页 |
| 1.5 纤维素酶基因在外源宿主中的表达 | 第21-25页 |
| 1.5.1 细菌宿主 | 第21-22页 |
| 1.5.2 真菌宿主 | 第22-25页 |
| 1.5.3 动物细胞宿主 | 第25页 |
| 1.5.4 无细胞表达 | 第25页 |
| 1.6 本研究的目的、内容及技术路线 | 第25-27页 |
| 1.6.1 研究目的和内容 | 第25-26页 |
| 1.6.2 本实验的技术路线 | 第26-27页 |
| 第二章 材料和方法 | 第27-41页 |
| 2.1 材料 | 第27-28页 |
| 2.1.1 质粒及菌株 | 第27-28页 |
| 2.1.2 培养基、溶液和抗生素的配制 | 第28页 |
| 2.2 方法 | 第28-41页 |
| 2.2.1 Tcce17A完整DNA序列的克隆 | 第28-29页 |
| 2.2.2 Tcce17A cDNA序列的克隆 | 第29-31页 |
| 2.2.3 包含Tcce17A的重组毕赤酵母的构建 | 第31-34页 |
| 2.2.4 包含Tcce17A的重组毕赤酵母的表达 | 第34-36页 |
| 2.2.5 TcCe17A酶学特性的研究 | 第36-41页 |
| 第三章 结果与分析 | 第41-60页 |
| 3.1 纤维素降解真菌BM48-3的Tcce17A完整DNA序列的克隆 | 第41-42页 |
| 3.1.1 真菌BM48-3基因组DNA的提取 | 第41页 |
| 3.1.2 真菌BM48-3的Tccel7A完整DNA序列的克隆 | 第41-42页 |
| 3.2 纤维素降解真菌BM48-3的Tccel7A全长cDNA序列的克隆 | 第42-47页 |
| 3.2.1 丝状真菌总RNA的提取 | 第42-43页 |
| 3.2.2 真菌BM48-3的Tccel7A全长cDNA序列的克隆 | 第43-47页 |
| 3.3 BM48-3的Tccel7A在毕赤酵母中的表达 | 第47-60页 |
| 3.3.1 重组毕赤酵母GXN a A4831和GXN9K4831的构建 | 第47页 |
| 3.3.2 重组转化子的鉴定 | 第47-48页 |
| 3.3.3 重组毕赤酵母GXN9K4831的Tccel7A诱导表达 | 第48-50页 |
| 3.3.4 重组毕赤酵母酶活力的测定 | 第50页 |
| 3.3.5 重组毕赤酵母GXN9K4831-16胞外表达产物的鉴定 | 第50-52页 |
| 3.3.6 重组蛋白TcCel7A的纯化 | 第52页 |
| 3.3.7 重组毕赤酵母酶学特性的分析 | 第52-60页 |
| 第四章 讨论 | 第60-68页 |
| 4.1 出发菌株、基因的选择 | 第60页 |
| 4.2 纤维二糖水解酶Ⅰ基因的表达 | 第60-64页 |
| 4.2.1 宿主的选择 | 第60-61页 |
| 4.2.2 毕赤酵母宿主菌株的选择 | 第61-62页 |
| 4.2.3 载体选择 | 第62页 |
| 4.2.4 转化效率 | 第62-63页 |
| 4.2.5 G418浓度梯度筛选多拷贝重组酵母 | 第63页 |
| 4.2.6 高密度培养 | 第63-64页 |
| 4.2.7 密码子优化 | 第64页 |
| 4.3 纤维二糖水解酶Ⅰ酶学特性的讨论 | 第64-68页 |
| 4.3.1 TcCel7A的最适pH、温度以及动力学常数K_m、V_(max)的讨论 | 第64-66页 |
| 4.3.2 螯合剂、表面活性剂、还原剂和金属离子对TcCel7A的影响的讨论 | 第66页 |
| 4.3.3 TcCel7A的底物特异性和水解产物鉴定结果的讨论 | 第66-68页 |
| 第五章 结论与展望 | 第68-70页 |
| 5.1 结论 | 第68-69页 |
| 5.2 展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-79页 |
| 附录一 培养基配方 | 第79-80页 |
| 附录二 溶液和抗生素的配制 | 第80-82页 |
| 附录三 载体 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
