| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 缩略语 | 第8-14页 |
| 第一部分 特异性结合DON抗原-抗体复合物纳米抗体的淘选、鉴定及表达 | 第14-59页 |
| 第1章 文献综述 | 第14-26页 |
| 1.1 小分子物质非竞争型免疫分析技术的研究进展 | 第14-18页 |
| 1.1.1 基于生物素标记法的小分子物质非竞争型免疫分析 | 第14-15页 |
| 1.1.2 基于抗独特型抗体的小分子物质非竞争型免疫分析 | 第15-16页 |
| 1.1.3 基于抗异型抗体的小分子物质非竞争型免疫分析 | 第16-17页 |
| 1.1.4 基于开放式夹心ELISA的小分子物质竞争型免疫分析 | 第17-18页 |
| 1.2 脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其分析方法的研究进展 | 第18-23页 |
| 1.2.1 脱氧雪腐镰刀菌烯醇的物化性质 | 第18-19页 |
| 1.2.2 脱氧雪腐镰刀菌烯醇的毒性作用 | 第19-20页 |
| 1.2.3 脱氧雪腐镰刀菌烯醇的污染状况及其限量标准 | 第20-22页 |
| 1.2.4 脱氧雪腐镰刀菌烯醇的分析方法 | 第22-23页 |
| 1.3 纳米抗体简介 | 第23-26页 |
| 1.3.1 纳米抗体的特点 | 第24-25页 |
| 1.3.2 纳米抗体的应用 | 第25-26页 |
| 第2章 特异性结合DON抗原-抗体复合物纳米抗体的淘选、鉴定 | 第26-42页 |
| 2.1 材料、仪器和试剂 | 第26-28页 |
| 2.1.1 主要材料 | 第26页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第26-27页 |
| 2.1.3 试剂 | 第27-28页 |
| 2.2 试验方法 | 第28-33页 |
| 2.2.1 DON单克隆抗体的纯化 | 第28页 |
| 2.2.2 DON单克隆抗体的性能分析 | 第28-29页 |
| 2.2.3 DON单克隆抗体结合DON的饱和度分析 | 第29-30页 |
| 2.2.4 特异性结合 DON 抗原抗体复合物纳米抗体的淘选及鉴定 | 第30-32页 |
| 2.2.5 基于噬菌体展示纳米抗体的DON非竞争型ELISA | 第32-33页 |
| 2.3 结果与分析 | 第33-39页 |
| 2.3.1 DON单克隆抗体的纯化 | 第33-34页 |
| 2.3.2 特异性结合DON抗原-抗体复合物的噬菌体展示纳米抗体淘选结果 | 第34-37页 |
| 2.3.3 基于噬菌体展示纳米抗体的非竞争型ELISA分析DON曲线的建立 | 第37-39页 |
| 2.4 讨论 | 第39-40页 |
| 2.5 小结 | 第40-42页 |
| 第3章 特异性结合DON抗原抗体复合物纳米抗体的表达及鉴定 | 第42-59页 |
| 3.1 材料、仪器和试剂 | 第42-44页 |
| 3.1.1 主要材料 | 第42页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第42-43页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第43-44页 |
| 3.2 实验方法 | 第44-49页 |
| 3.2.1 感受态细胞的制备 | 第44页 |
| 3.2.2 目的质粒的提取 | 第44页 |
| 3.2.3 重组表达载体的构建 | 第44-45页 |
| 3.2.4 菌落PCR验证阳性克隆子 | 第45-46页 |
| 3.2.5 重组质粒的提取 | 第46页 |
| 3.2.6 重组表达载体转入表达宿主菌 | 第46-47页 |
| 3.2.7 特异性结合DON抗原抗体复合物纳米抗体的诱导表达 | 第47页 |
| 3.2.8 镍柱纯化目的蛋白 | 第47-48页 |
| 3.2.9 特异性结合DON抗原-抗体复合物纳米抗体结合活性的鉴定 | 第48-49页 |
| 3.4 结果与分析 | 第49-56页 |
| 3.4.1 纳米抗体编码基因的提取 | 第49-51页 |
| 3.4.2 纳米抗体表达载体的构建 | 第51页 |
| 3.4.3 特异性结合DON抗原-抗体复合物纳米抗体的原核表达及纯化 | 第51-53页 |
| 3.4.4 特异性结合DON抗原-抗体复合物纳米抗体的纯化 | 第53-54页 |
| 3.4.5 特异性结合DON抗原-抗体复合物纳米抗体活性的鉴定 | 第54-56页 |
| 3.5 讨论 | 第56-57页 |
| 3.6 小结 | 第57-59页 |
| 第二部分 基于噬菌体展示纳米抗体的定量免疫PCR检测Bt蛋白Cry1Ac方法的建立 | 第59-80页 |
| 第4章 文献综述 | 第59-64页 |
| 4.1 Bt蛋白 | 第59页 |
| 4.2 Bt蛋白Cry1Ac | 第59-60页 |
| 4.3 Bt蛋白的检测意义 | 第60页 |
| 4.4 转基因成分Bt蛋白的检测 | 第60-62页 |
| 4.4.1 基于蛋白检测 | 第60-61页 |
| 4.4.2 基于核酸检测 | 第61-62页 |
| 4.5 定量免疫PCR技术（Quantitative immuno-PCR, Q-IPCR） | 第62-64页 |
| 4.5.1 定量免疫PCR基本原理 | 第62页 |
| 4.5.2 定量免疫PCR系统组成 | 第62-64页 |
| 第5章 基于噬菌体展示纳米抗体的荧光定量PCR检测Cry1Ac方法的建立 | 第64-78页 |
| 5.1 材料、仪器及试剂 | 第64-65页 |
| 5.1.1 主要材料 | 第64页 |
| 5.1.2 主要仪器 | 第64页 |
| 5.1.3 试剂 | 第64-65页 |
| 5.2 试验方法 | 第65-69页 |
| 5.2.1 抗Cry1Ac噬菌体展示纳米抗体（P-72)的扩增 | 第65页 |
| 5.2.2 双抗夹心ELISA检测Cry1Ac标准曲线的建立 | 第65-66页 |
| 5.2.3 引物设计 | 第66页 |
| 5.2.4 引物验证 | 第66页 |
| 5.2.5 定量免疫PCR工作条件的优化 | 第66-68页 |
| 5.2.6 基于噬菌体展示纳米抗体的荧光定量 PCR 检测 Cry1Ac 标准曲线的建立 | 第68页 |
| 5.2.7 交叉反应验证 | 第68页 |
| 5.2.8 加标回收实验 | 第68-69页 |
| 5.3 结果与分析 | 第69-75页 |
| 5.3.1 引物的验证 | 第69页 |
| 5.3.2 退火温度的优化 | 第69-71页 |
| 5.3.3 噬菌体投入量的优化 | 第71页 |
| 5.3.4 捕获抗体包被浓度的优化 | 第71-72页 |
| 5.3.5 基于噬菌体展示纳米抗体的定量免疫 PCR 检测 Cry1Ac 标准曲线的 | 第72-74页 |
| 5.3.6 交叉反应 | 第74页 |
| 5.3.7 加标回收率验证 | 第74-75页 |
| 5.4 讨论 | 第75-77页 |
| 5.5 小结 | 第77-78页 |
| 第6章 结论与展望 | 第78-80页 |
| 6.1 结论 | 第78-79页 |
| 6.1.1 特异性结合DON抗原-抗体免疫复合物纳米抗体的亲和淘选及鉴定 | 第78页 |
| 6.1.2 可特异性结合DON抗原-抗体免疫复合物纳米抗体的原核表达 | 第78页 |
| 6.1.3 基于噬菌体展示纳米抗体的定量免疫PCR检测Bt蛋白Cry1Ac方法的建立 | 第78-79页 |
| 6.2 展望 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-87页 |
| 攻读硕士期间的研究成果 | 第87页 |
