| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 第1章 绪论 | 第11-20页 |
| 1.1 海藻糖简介 | 第11-13页 |
| 1.1.1 海藻糖的结构与来源 | 第11页 |
| 1.1.2 海藻糖的合成方法概述 | 第11-12页 |
| 1.1.3 海藻糖的应用 | 第12-13页 |
| 1.2 融合酶研究进展 | 第13-14页 |
| 1.2.1 融合酶简述 | 第13页 |
| 1.2.2 融合酶连接技术 | 第13-14页 |
| 1.3 蛋白异源表达技术 | 第14-15页 |
| 1.3.1 异源表达技术的简介 | 第14页 |
| 1.3.2 异源表达体系的分类 | 第14页 |
| 1.3.3 异源表达技术的缺点 | 第14-15页 |
| 1.4 蛋白纯化技术的发展 | 第15-17页 |
| 1.4.1 蛋白纯化技术简介 | 第15页 |
| 1.4.2 蛋白纯化技术的流程 | 第15-16页 |
| 1.4.3 蛋白的纯化现状 | 第16-17页 |
| 1.5 立题的背景和研究意义 | 第17-20页 |
| 1.5.1 立题的背景 | 第17页 |
| 1.5.2 研究的意义 | 第17-20页 |
| 第2章 优化 β-淀粉酶-海藻糖合酶融合酶的诱导表达 | 第20-36页 |
| 2.1 引言 | 第20页 |
| 2.2 实验材料 | 第20-22页 |
| 2.2.1 菌种 | 第20页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第20-21页 |
| 2.2.3 实验试剂 | 第21-22页 |
| 2.2.4 培养基 | 第22页 |
| 2.2.5 试剂的配制方法 | 第22页 |
| 2.3 实验方法 | 第22-25页 |
| 2.3.1 重组工程菌的验证 | 第22-23页 |
| 2.3.2 单因素优化培养及诱导条件 | 第23-25页 |
| 2.3.3 正交法优化金属盐 | 第25页 |
| 2.3.4 优化培养基对融合酶表达的影响 | 第25页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第25-34页 |
| 2.4.1 重组工程菌的验证结果 | 第25-27页 |
| 2.4.2 单因素优化培养基及诱导条件试验 | 第27-33页 |
| 2.4.3 培养基优化结果 | 第33-34页 |
| 2.5 本章小结 | 第34-36页 |
| 第3章 β-淀粉酶-海藻糖合酶融合酶的分离纯化 | 第36-46页 |
| 3.1 引言 | 第36页 |
| 3.2 实验材料 | 第36-37页 |
| 3.2.1 菌种 | 第36页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第36页 |
| 3.2.3 培养基 | 第36-37页 |
| 3.2.4 试剂的配制方法 | 第37页 |
| 3.3 试验方法 | 第37-39页 |
| 3.3.1 工程菌活化与诱导 | 第37页 |
| 3.3.2 考马斯亮蓝法标准蛋白曲线的绘制 | 第37-38页 |
| 3.3.3 菌体破碎方式的优化 | 第38页 |
| 3.3.4 融合酶纯化步骤 | 第38-39页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第39-44页 |
| 3.4.1 考马斯测蛋白标准曲线 | 第39页 |
| 3.4.2 工程菌破碎方式的优化 | 第39-41页 |
| 3.4.3 融合酶纯化步骤结果 | 第41-43页 |
| 3.4.4 融合酶纯化回收率 | 第43-44页 |
| 3.5 本章小结 | 第44-46页 |
| 第4章 β-淀粉酶-海藻糖合酶融合酶酶学特性的研究 | 第46-56页 |
| 4.1 引言 | 第46页 |
| 4.2 实验材料 | 第46页 |
| 4.2.1 酶的来源 | 第46页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第46页 |
| 4.2.3 主要试剂 | 第46页 |
| 4.2.4 培养基 | 第46页 |
| 4.3 试验方法 | 第46-48页 |
| 4.3.1 融合酶酶活测定方法 | 第46-47页 |
| 4.3.2 融合酶最适反应温度的测定 | 第47页 |
| 4.3.3 融合酶最适反应pH测定 | 第47页 |
| 4.3.4 融合酶催化时间的测定 | 第47页 |
| 4.3.5 融合酶热稳定性的差异 | 第47页 |
| 4.3.6 融合酶的酸碱稳定性差异 | 第47页 |
| 4.3.7 不同金属离子及试剂对融合酶影响 | 第47-48页 |
| 4.3.8 融合酶与混合酶系酶学特性的对比 | 第48页 |
| 4.3.9 双功能融合酶动力学参数测定 | 第48页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第48-54页 |
| 4.4.1 最适反应温度的测定 | 第48-49页 |
| 4.4.2 最适反应pH的测定 | 第49页 |
| 4.4.3 最适反应时间的测定 | 第49-50页 |
| 4.4.4 热稳定性差异 | 第50页 |
| 4.4.5 酸碱稳定性差异 | 第50-51页 |
| 4.4.6 金属离子及添加剂影响的差异 | 第51页 |
| 4.4.7 双功能融合酶动力学参数的研究 | 第51-52页 |
| 4.4.8 融合酶BT3与亲本酶酶学特性的对比 | 第52-54页 |
| 4.5 本章小结 | 第54-56页 |
| 第5章 β-淀粉酶-海藻糖合酶融合酶连接肽的优化 | 第56-64页 |
| 5.1 引言 | 第56页 |
| 5.2 实验材料仪器 | 第56-57页 |
| 5.2.1 工程菌及所需质粒 | 第56页 |
| 5.2.2 实验仪器 | 第56页 |
| 5.2.3 分子材料 | 第56-57页 |
| 5.2.4 主要试剂 | 第57页 |
| 5.2.5 培养基 | 第57页 |
| 5.2.6 试剂的配制方法 | 第57页 |
| 5.3 实验方法 | 第57-58页 |
| 5.3.1 连接肽替换片段的设计 | 第57页 |
| 5.3.2 菌种的活化 | 第57-58页 |
| 5.3.3 质粒pET-28a-bap3ts和pUC57-p3-b的提取 | 第58页 |
| 5.3.4 连接肽替代片段的双酶切与连接 | 第58页 |
| 5.3.5 pET-28a-bap3ts连接肽替换后的检测 | 第58页 |
| 5.3.6 重组菌的诱导表达与酶活检测 | 第58页 |
| 5.3.7 连接肽替换后的酶学特性差异 | 第58页 |
| 5.4 实验结果与讨论 | 第58-63页 |
| 5.4.1 质粒pET-28a-bap3ts和pUC57-p3-b的提取 | 第59-60页 |
| 5.4.2 质粒pET-28a-bap3ts和pUC57-p3-b双酶切与连接 | 第60页 |
| 5.4.3 质粒pET-28a-bap3ts片段替换后的检测 | 第60-61页 |
| 5.4.4 重组质粒pET-28a-bap3bts三酶切 | 第61页 |
| 5.4.5 重组菌的诱导表达与酶活检测 | 第61页 |
| 5.4.6 连接肽替换后的酶学特性差异 | 第61-62页 |
| 5.4.7 融合酶改造后催化能力对比 | 第62-63页 |
| 5.5 本章小结 | 第63-64页 |
| 第6章 结论与展望 | 第64-66页 |
| 6.1 结论 | 第64-65页 |
| 6.2 展望 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 致谢 | 第72-74页 |
| 在学期间主要研究成果 | 第74页 |
