| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略语(Abbreviations) | 第9-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-22页 |
| 1.1 二硫吡咯酮类化合物 | 第10-18页 |
| 1.1.1 二硫吡咯酮类化合物的结构特点和分类 | 第10-11页 |
| 1.1.2 二硫吡咯酮类化合物的生物活性和作用机制 | 第11-13页 |
| 1.1.3 Thiolutin和holomycin的分离 | 第13-14页 |
| 1.1.4 Holomycin和thiolutin的生物合成研究 | 第14-16页 |
| 1.1.5 本课题组对holomycin和thiolutin的生物合成机制的研究 | 第16-18页 |
| 1.2 链霉菌宿主蛋白诱导表达系统 | 第18-19页 |
| 1.3 orf4基因片段对链霉菌次级代谢产物的影响 | 第19-21页 |
| 1.4 研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-36页 |
| 2.1.1 菌株、引物和质粒 | 第22-31页 |
| 2.1.2 主要分子生物学和生化试剂 | 第31-34页 |
| 2.1.3 培养基 | 第34-35页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第35-36页 |
| 2.2 实验方法 | 第36-42页 |
| 2.2.1 菌种培养及保藏 | 第36页 |
| 2.2.2 链霉菌总DNA的提取—醋酸钾法 | 第36页 |
| 2.2.3 PCR扩增基因片段 | 第36-37页 |
| 2.2.4 DNA片段回收(Axygen DNA凝胶回收试剂盒) | 第37页 |
| 2.2.5 醋酸钠纯化DNA | 第37页 |
| 2.2.6 酶连反应 | 第37-38页 |
| 2.2.7 大肠杆菌感受态细胞制备及DNA转化 | 第38页 |
| 2.2.8 大肠杆菌质粒的小量抽提 | 第38页 |
| 2.2.9 目的蛋白的表达与纯化 | 第38-39页 |
| 2.2.10 Western杂交 | 第39-40页 |
| 2.2.11 抗体制备 | 第40页 |
| 2.2.12 抗体的初步纯化 | 第40-41页 |
| 2.2.13 超速离心分离膜蛋白和胞质蛋白的方法 | 第41页 |
| 2.2.14 变铅青链霉菌ZX1原生质体的制备及转化 | 第41页 |
| 2.2.15 体外蛋白-蛋白相互作用(pulldown) | 第41-42页 |
| 第三章 结果与分析 | 第42-71页 |
| 3.1 Holomycin和Thiolutin基因簇中部分关键酶的表达和纯化 | 第42-60页 |
| 3.1.1 3个非核糖体多肽合成酶HlmE、AutE和ThiE的表达和纯化 | 第42-45页 |
| 3.1.2 Ⅱ型硫酯酶HlmK的表达和纯化 | 第45-47页 |
| 3.1.3 酰胺合成酶HlmL的表达和纯化 | 第47-48页 |
| 3.1.4 Ⅰ型硫酯酶HlmC的表达和纯化 | 第48-50页 |
| 3.1.5 4个酰基转移酶HlmA、AutA、ThiA1和ThiA2的表达和纯化 | 第50-56页 |
| 3.1.6 PnitA-NitR诱导表达系统的构建 | 第56-60页 |
| 3.2 未知功能基因orf4的功能探索 | 第60-71页 |
| 3.2.1 Orf4蛋白的表达和纯化条件 | 第60-63页 |
| 3.2.2 利用pull-down寻找与Orf4相互作用的蛋白 | 第63页 |
| 3.2.3 Orf4蛋白自磷酸化活性的检测 | 第63-64页 |
| 3.2.4 Orf4抗体的制备纯化以及鉴定 | 第64-66页 |
| 3.2.5 链霉菌宿主中Orf4抗体的应用 | 第66-69页 |
| 3.2.6 orf4基因的功能验证 | 第69-71页 |
| 第四章 讨论 | 第71-74页 |
| 参考文献 | 第74-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
