| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第14-35页 |
| 1.1 课题来源及研究的目的和意义 | 第14-15页 |
| 1.2 表观遗传学 | 第15-19页 |
| 1.2.1 基因组印记 | 第16-17页 |
| 1.2.2 DNA甲基化及其动态变化 | 第17-19页 |
| 1.3 印记基因的调控机制 | 第19-24页 |
| 1.3.1 差异甲基化区对印记基因的调控 | 第20页 |
| 1.3.2 组蛋白修饰对印记基因的调控 | 第20-21页 |
| 1.3.3 长非编码RNA对印记基因的调控 | 第21-22页 |
| 1.3.4 参与印记的建立和维持的调控蛋白 | 第22-24页 |
| 1.4 小鼠Dlk1-Dio3印记区域 | 第24-31页 |
| 1.4.1 已知的印记基因及其功能 | 第24-25页 |
| 1.4.2 已知的差异甲基化区及其敲除研究 | 第25-28页 |
| 1.4.3 Dlk1-Dio3印记区域与i PS细胞重编程程度的关系 | 第28-29页 |
| 1.4.4 miR-341/miR-1188附近的插入突变与上下游基因的表达异常 | 第29-31页 |
| 1.5 锌指蛋白CTCF | 第31-33页 |
| 1.5.1 CTCF的绝缘子功能 | 第31-32页 |
| 1.5.2 CTCF介导的长距离相互作用 | 第32-33页 |
| 1.6 本论文的研究内容及技术路线 | 第33-35页 |
| 1.6.1 主要研究内容 | 第33-34页 |
| 1.6.2 技术路线 | 第34-35页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第35-53页 |
| 2.1 实验材料 | 第35-38页 |
| 2.1.1 实验动物、载体及细胞系 | 第35页 |
| 2.1.2 实验试剂等 | 第35-36页 |
| 2.1.3 实验仪器及常用网站和软件 | 第36-38页 |
| 2.2 实验方法 | 第38-53页 |
| 2.2.1 精子、卵细胞及各个发育阶段的胚胎和组织的获取 | 第38页 |
| 2.2.2 核酸的提取等常规分子生物学技术 | 第38-41页 |
| 2.2.3 RNA探针的制备 | 第41-42页 |
| 2.2.4 原位杂交 | 第42-43页 |
| 2.2.5 miRNA的定量PCR | 第43-45页 |
| 2.2.6 印记分析 | 第45-46页 |
| 2.2.7 甲基化分析 | 第46-47页 |
| 2.2.8 染色质免疫共沉淀 | 第47-50页 |
| 2.2.9 软琼脂集落形成实验 | 第50-53页 |
| 第3章 miR-341、miR-1188在小鼠胚胎中的表达模式和印记状况 | 第53-63页 |
| 3.1 引言 | 第53页 |
| 3.2 miR-341、miR-1188位点的生物信息学分析 | 第53-56页 |
| 3.3 miR-341、miR-1188初级转录本的原位表达分析 | 第56-58页 |
| 3.4 miR-341、miR-1188成熟体的定量表达分析 | 第58-59页 |
| 3.5 miR-341、miR-1188初级转录本的印记分析 | 第59-62页 |
| 3.6 本章小结 | 第62-63页 |
| 第4章 CGI-1 和CGI-2 的DNA甲基化动态变化过程的分析 | 第63-76页 |
| 4.1 引言 | 第63页 |
| 4.2 miR-341、miR-1188附近Cp G岛的预测 | 第63-66页 |
| 4.3 CGI-1 和CGI-2 在发育中后期的胚胎中的甲基化分析 | 第66-68页 |
| 4.3.1 CGI-1 在E15.5 和E18.5 天各组织中的甲基化分析 | 第66-67页 |
| 4.3.2 CGI-2 在E15.5 和E18.5 天各组织中的甲基化分析 | 第67-68页 |
| 4.4 CGI-1 和CGI-2 在配子和着床前后的胚胎中的甲基化分析 | 第68-75页 |
| 4.4.1 CGI-1 和CGI-2 在精子和卵细胞中的甲基化分析 | 第68-69页 |
| 4.4.2 CGI-1 和CGI-2 在桑葚胚和囊胚中的甲基化分析 | 第69-71页 |
| 4.4.3 CGI-1 和CGI-2 在着床后胚胎中的甲基化分析 | 第71-75页 |
| 4.5 本章小结 | 第75-76页 |
| 第5章 CGI-2 及其上下游区域的组蛋白修饰和CTCF结合的Ch IP分析 | 第76-89页 |
| 5.1 引言 | 第76页 |
| 5.2 组蛋白修饰H3K4me3和H3K9me3的Ch IP分析 | 第76-80页 |
| 5.3 CGI-2 及其上下游区域的CTCF结合位点的预测 | 第80-85页 |
| 5.3.1 人类ENCODE计划中CTCF Ch IP-seq数据的分析 | 第81-83页 |
| 5.3.2 CTCF结合基序的保守性分析和详细定位 | 第83-85页 |
| 5.4 CTCF结合位点的Ch IP验证及其等位特异性分析 | 第85-88页 |
| 5.5 本章小结 | 第88-89页 |
| 第6章 差异甲基化区CGI-2 具有依赖于CTCF的绝缘子活性 | 第89-103页 |
| 6.1 引言 | 第89页 |
| 6.2 绝缘子分析用载体的构建 | 第89-98页 |
| 6.2.1 p NI骨架载体的构建 | 第91-94页 |
| 6.2.2 待分析的各目的片段的连接及CTCF结合位点的突变 | 第94-98页 |
| 6.3 软琼脂集落形成实验的结果 | 第98-102页 |
| 6.4 本章小结 | 第102-103页 |
| 结论 | 第103-105页 |
| 参考文献 | 第105-118页 |
| 附录Ⅰ | 第118-120页 |
| 附录Ⅱ | 第120-123页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文及其它成果 | 第123-126页 |
| 致谢 | 第126-127页 |
| 个人简历 | 第127页 |
