| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 主要符号列表 | 第9-10页 |
| 文献综述 | 第10-18页 |
| 1 猪圆环病毒的历史与研究概况 | 第10-11页 |
| 2 PCV的分子生物学特征 | 第11页 |
| 3 PCV主要蛋白的研究 | 第11-13页 |
| 4 流行病学和致病机理 | 第13-15页 |
| 5 PCV2诊断技术的研究 | 第15-16页 |
| 6 研究目的与意义 | 第16-18页 |
| 引言 | 第18-19页 |
| 1 材料与方法 | 第19-31页 |
| 1.1 载体、菌株 | 第19页 |
| 1.2 主要试剂与器材 | 第19-20页 |
| 1.2.1 主要器材(见表 1) | 第19页 |
| 1.2.2 主要试剂 | 第19-20页 |
| 1.3 主要试剂配制 | 第20-21页 |
| 1.4 PCV2 Cap基因的克隆 | 第21-27页 |
| 1.5 重组蛋白的诱导表达 | 第27页 |
| 1.6 重组蛋白的分析鉴定 | 第27-28页 |
| 1.7 蛋白的纯化 | 第28-29页 |
| 1.8 纯化蛋白的分析 | 第29-30页 |
| 1.9 检测PCV2抗体间接ELISA方法的建立 | 第30-31页 |
| 1.9.1 重组蛋白和阴阳性血清的最佳工作稀释度的确定 | 第30页 |
| 1.9.2 抗原最佳包被条件的确定 | 第30页 |
| 1.9.3 封闭条件的确定 | 第30页 |
| 1.9.4 羊抗猪酶标二抗最佳稀释度的确定 | 第30-31页 |
| 1.9.5 待检血清的孵育时间的确定 | 第31页 |
| 1.9.6 羊抗猪酶标二抗作用时间的确定 | 第31页 |
| 1.9.7 底物液作用时间的确定 | 第31页 |
| 1.9.8 阴、阳性临界值的确定 | 第31页 |
| 1.9.9 特异性试验 | 第31页 |
| 1.9.10 重复性试验 | 第31页 |
| 1.9.11 间接ELISA方法与商品试剂盒的符合率比较 | 第31页 |
| 1.9.12 间接ELISA方法临床初步应用 | 第31页 |
| 2 结果与分析 | 第31-41页 |
| 2.1 PCV2 Cap基因的克隆 | 第31-33页 |
| 2.1.1 ORF2基因的扩增 | 第31-32页 |
| 2.1.2 克隆质粒的构建和鉴定 | 第32页 |
| 2.1.3 重组表达质粒的构建与鉴定 | 第32-33页 |
| 2.2 目的基因诱导表达与分析 | 第33-35页 |
| 2.2.1 诱导剂IPTG浓度的确定 | 第33页 |
| 2.2.2 IPTG诱导时间的优化和可溶性结果分析 | 第33-34页 |
| 2.2.3 重组蛋白的纯化鉴定 | 第34-35页 |
| 2.2.4 蛋白浓度的测定 | 第35页 |
| 2.3 检测PCV2抗体间接ELISA方法的建立 | 第35-41页 |
| 2.3.1 蛋白最佳包被浓度和血清最佳稀释比例的确定 | 第35-36页 |
| 2.3.2 最佳包被条件的确定 | 第36页 |
| 2.3.3 封闭条件的确定 | 第36-37页 |
| 2.3.4 酶标二抗稀释比例的确定 | 第37页 |
| 2.3.5 ELISA反应时间的确定 | 第37-38页 |
| 2.3.6 ELISA方法阴、阳性临界值的确定和结果判定 | 第38-39页 |
| 2.3.7 特异性试验 | 第39-40页 |
| 2.3.8 重复性试验 | 第40页 |
| 2.3.9 间接ELISA方法的血清学样品检测结果 | 第40页 |
| 2.3.10 间接ELISA方法临床初步应用 | 第40-41页 |
| 3 讨论 | 第41-43页 |
| 4 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 作者简介 | 第52-53页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第53页 |
