| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 英文缩略表 | 第10-11页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-21页 |
| 综述一 牛病毒性腹泻病毒的基本概况 | 第12-16页 |
| 1.BVDV基因结构及其编码的蛋白 | 第12-14页 |
| 1.1BVDV基因的结构 | 第12页 |
| 1.2 BVDV编码的蛋白 | 第12-14页 |
| 2.BVDV持续性感染及免疫抑制 | 第14页 |
| 3.BVDV的诊断及防治现状 | 第14-15页 |
| 4.小结与展望 | 第15-16页 |
| 综述二 miRNA对病毒调控作用的研究进展 | 第16-19页 |
| 1. miRNA概述 | 第16-17页 |
| 2. miRNA的调控机制 | 第17页 |
| 3. MiRNA与病毒感染之间的联系及应用 | 第17-18页 |
| 4. 小结与展望 | 第18-19页 |
| 综述三 锌指蛋白的抗病毒作用研究进展 | 第19-21页 |
| 1.锌指蛋白的发现及作用 | 第19页 |
| 2.锌指蛋白抗病毒机理 | 第19-20页 |
| 3.锌指蛋白未来研究方向 | 第20-21页 |
| 第二章 实验研究 | 第21-60页 |
| 实验一 miR-2459 对BVDV复制水平影响的研究 | 第21-33页 |
| 1 材料与方法 | 第21-28页 |
| 1.1 材料 | 第21-22页 |
| 1.2 方法 | 第22-28页 |
| 2 结果 | 第28-31页 |
| 2.1 BVDV NADL病毒TCID50的测定 | 第28-29页 |
| 2.2 BVDV NADL感染MDBK细胞后miR-2459 水平的检测 | 第29-30页 |
| 2.3 qRT-PCR检测miR-2459 对BVDV E0 mRNA水平的影响 | 第30-31页 |
| 2.4 Reed-Münch法检测miR-2459 对BVDV复制的影响 | 第31页 |
| 3 讨论 | 第31-32页 |
| 4 小结 | 第32-33页 |
| 实验二 miR-2459 对锌指抗病毒蛋白ZAP表达的影响的研究 | 第33-48页 |
| 1 材料与方法 | 第33-42页 |
| 1.1 材料 | 第33-34页 |
| 1.2 方法 | 第34-42页 |
| 2 结果 | 第42-46页 |
| 2.1 miR-2459 靶基因的预测 | 第42-43页 |
| 2.2 miR-2459 识别位点及其突变序列扩增 | 第43页 |
| 2.3 双荧光素酶报告基因载体的构建 | 第43-44页 |
| 2.5 qRT-PCR检测转染miR-2459 对ZAP mRNA水平影响 | 第44-45页 |
| 2.6 qRT-PCR检测BVDV NADL感染对ZAP mRNA水平影响 | 第45-46页 |
| 3 讨论 | 第46-47页 |
| 4 小结 | 第47-48页 |
| 实验三 牛锌指蛋白ZAP过表达慢病毒载体构建及其过表达细胞株的鉴定 | 第48-60页 |
| 1 材料与方法 | 第49-53页 |
| 1.1 载体与试剂 | 第49页 |
| 1.2 方法 | 第49-53页 |
| 2 结果与分析 | 第53-58页 |
| 2.1 锌指蛋白基因ZAP的克隆鉴定 | 第53-54页 |
| 2.2 PCR扩增产物的胶回收及连接T载体 | 第54页 |
| 2.3 转化，菌液PCR并送公司测序 | 第54页 |
| 2.4 慢病毒重组载体pLEX-EGFP-ZAP的构建 | 第54-55页 |
| 2.5 慢病毒重组载体pLEX-EGFP-ZAP的双酶切鉴定 | 第55页 |
| 2.6 过表达慢病毒重组载体的包装及鉴定 | 第55-56页 |
| 2.7 慢病毒重组载体毒液侵染及过表达效果鉴定 | 第56页 |
| 2.8 免疫荧光试验检测锌指蛋白ZAP的表达水平 | 第56-57页 |
| 2.9 BVDV感染过表达ZAP的MDBK细胞后E0基因的复制水平 | 第57页 |
| 2.10 检测BVDV感染过表达ZAP的MDBK细胞后TCID50的变化 | 第57-58页 |
| 3 讨论 | 第58-59页 |
| 4 小结 | 第59-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 创新点 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 作者简介 | 第69-70页 |
| 导师评阅表 | 第70页 |
