| 全文摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 英文缩略词表 | 第13-14页 |
| 引言 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 单核细胞增生性李斯特菌LPXTG蛋白及蛋白组学技术研究进展 | 第15-23页 |
| 1. 单核细胞增生性李斯特菌的一般特性 | 第15-16页 |
| 2. 发病机制 | 第16页 |
| 3. 单增李斯特菌细胞壁表面LPXTG蛋白功能概述 | 第16-19页 |
| 3.1 inlA（Lmo0433） | 第17页 |
| 3.2 inlF | 第17页 |
| 3.3 inlJ | 第17页 |
| 3.4 ActA蛋白（Lmo2085） | 第17-18页 |
| 3.5 Vip（Lmo0320） | 第18页 |
| 3.6 LapB（Lmo1666） | 第18页 |
| 3.7 InlH（Lmo0263） | 第18页 |
| 3.8 其余LPXTG蛋白功能 | 第18-19页 |
| 4. 蛋白组学研究进展[38] | 第19-23页 |
| 4.1 分离技术 | 第19-20页 |
| 4.2 鉴定技术 | 第20-21页 |
| 4.3 定量技术 | 第21页 |
| 4.4 生物信息学分析 | 第21-23页 |
| 第二章 试验内容 | 第23-53页 |
| 试验一 变溶菌素（Mutanolysin）酶解Lm细胞壁最佳条件的筛选 | 第23-29页 |
| 1. 材料 | 第24页 |
| 1.1 菌株和试剂 | 第24页 |
| 1.2. 主要仪器 | 第24页 |
| 2. 方法 | 第24-25页 |
| 2.1 菌种活化 | 第24页 |
| 2.2 变溶菌素酶解临床分离株LM90SB2 | 第24-25页 |
| 2.3 原生质体形成率的测定 | 第25页 |
| 2.4 细胞膜完整性测定 | 第25页 |
| 2.5 细胞壁表面蛋白的制备及其浓度的测定 | 第25页 |
| 3. 结果 | 第25-27页 |
| 3.1 Mutanolysin酶浓度及酶解时间对制备原生质体的影响 | 第25-26页 |
| 3.2 变溶菌素酶浓度和酶解时间对细胞膜完整性的影响 | 第26-27页 |
| 3.3 变溶菌素酶解时间对细胞壁表面蛋白的浓度的影响 | 第27页 |
| 4. 讨论 | 第27-29页 |
| 试验二 LM90SB2 srtA基因缺失株细胞壁差异蛋白筛选 | 第29-35页 |
| 1.材料 | 第29-30页 |
| 1.1 菌株 | 第29页 |
| 1.2 主要试剂 | 第29页 |
| 1.3 主要仪器 | 第29-30页 |
| 2.方法 | 第30-31页 |
| 2.1 细胞壁蛋白的制备 | 第30页 |
| 2.2 蛋白质的裂解和定量 | 第30页 |
| 2.3 蛋白质的SDS-PAGE实验 | 第30页 |
| 2.4 蛋白质的FASP酶解 | 第30页 |
| 2.5 酶解产物的LC-MS/MS分析 | 第30-31页 |
| 2.6 差异细胞壁蛋白的筛选 | 第31页 |
| 3. 结果 | 第31-33页 |
| 3.1 蛋白质浓度的测定 | 第31页 |
| 3.2 SDS-PAGE分析 | 第31-32页 |
| 3.3 蛋白质鉴定及定量结果 | 第32页 |
| 3.4 LM90SB2与srtA基因缺失株差异蛋白的筛选 | 第32-33页 |
| 4 讨论 | 第33-35页 |
| 试验三 LM90SB2-△lmo2714缺失株的构建 | 第35-44页 |
| 1.材料 | 第35-37页 |
| 1.1 质粒和菌株 | 第35页 |
| 1.2 引物 | 第35-36页 |
| 1.3 主要试剂 | 第36页 |
| 1.4 主要实验仪器 | 第36-37页 |
| 1.5 主要试剂的配制 | 第37页 |
| 2.方法 | 第37-39页 |
| 2.1 扩增lmo2714基因上、下游同源臂 | 第37页 |
| 2.2 SOE-PCR | 第37页 |
| 2.3 △lmo2714与pMD19-T连接 | 第37-38页 |
| 2.4 pKSV7-△lmo2714的构建 | 第38页 |
| 2.5 LM90SB2感受态细胞的制备（青霉素G法） | 第38页 |
| 2.6 构建的pKSV7-△lmo2714质粒电转到李斯特菌感受态中 | 第38-39页 |
| 2.7 同源重组 | 第39页 |
| 2.8 缺失株LM90SB2-△lmo2714的遗传稳定性鉴定和生长特性的鉴定 | 第39页 |
| 3.结果 | 第39-42页 |
| 3.1 SOE-PCR检测lmo2714基因结果 | 第39-40页 |
| 3.2 重组穿梭质粒pKSV7-△lmo2714酶切鉴定结果 | 第40页 |
| 3.3 缺失株的筛选结果 | 第40-41页 |
| 3.4 LM90SB2-△lmo2714遗传稳定情况 | 第41-42页 |
| 4.讨论 | 第42-44页 |
| 试验四 单增李斯特菌lmo2714基因缺失株生物学特性研究 | 第44-53页 |
| 1.材料 | 第44-45页 |
| 1.1 试验动物、菌株及细胞 | 第44页 |
| 1.2 主要试剂 | 第44页 |
| 1.3 主要实验仪器 | 第44-45页 |
| 2.方法 | 第45-47页 |
| 2.1 生化特性鉴定 | 第45页 |
| 2.2 对酸碱环境耐受性的测定 | 第45页 |
| 2.3 测定生物被膜 | 第45-46页 |
| 2.4 细胞水平的毒力 | 第46-47页 |
| 2.5 小鼠水平的致病性 | 第47页 |
| 2.6 统计学分析 | 第47页 |
| 3.结果 | 第47-52页 |
| 3.1 亲本株与缺失株生化结果 | 第47页 |
| 3.2 环境耐受性结果 | 第47-48页 |
| 3.3 生物被膜测定结果 | 第48-49页 |
| 3.4 粘附、侵袭及胞内增殖结果 | 第49-51页 |
| 3.5 LD50的测定结果 | 第51页 |
| 3.6 Lm侵染小鼠各个脏器含菌量结果 | 第51-52页 |
| 4.讨论 | 第52-53页 |
| 全文结论 | 第53页 |
| 创新点 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 作者简介 | 第60-61页 |
| 石河子大学硕士研究生学位论文导师评阅表 | 第61页 |
