| 中文摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 符号说明 | 第9-11页 |
| 第一章 H9N2亚型禽流感病毒的变异与进化 | 第11-17页 |
| 1 H9亚型AIV的病原学特征 | 第11-12页 |
| 2 H9亚型AIV的变异特性 | 第12-13页 |
| 2.1 抗原漂移 | 第12-13页 |
| 2.2 抗原转变 | 第13页 |
| 3 H9N2亚型AIV的遗传进化 | 第13-14页 |
| 3.1 H9N2亚型AIV HA基因的进化 | 第13页 |
| 3.2 H9亚型AIV作为新型流感病毒的基因供体 | 第13-14页 |
| 4 H9亚型AIV的跨种传播 | 第14-15页 |
| 5 H9N2亚型AIV的疫苗 | 第15-16页 |
| 6 结论 | 第16-17页 |
| 第二章 表达H9亚型禽流感病毒血凝素的重组火鸡疱疹病毒构建及其免疫效力试验 | 第17-42页 |
| 1 材料 | 第17-19页 |
| 1.1 毒株、菌株和质粒 | 第17页 |
| 1.2 鸡胚及实验动物 | 第17-18页 |
| 1.3 主要试剂 | 第18页 |
| 1.3.1 主要化学试剂 | 第18页 |
| 1.3.2 分子生物学试剂 | 第18页 |
| 1.4 分子生物学软件 | 第18页 |
| 1.5 主要仪器 | 第18-19页 |
| 2 方法 | 第19-30页 |
| 2.1 H9亚型AIV HA基因的克隆及鉴定 | 第19-21页 |
| 2.1.1 刊物设计 | 第19页 |
| 2.1.2 病毒的扩增 | 第19页 |
| 2.1.3 病毒RNA的提取 | 第19-20页 |
| 2.1.4 RT-PCR | 第20-21页 |
| 2.1.5 HA基因遗传进化分析 | 第21页 |
| 2.2 真核表达载体pHVT-H9HA的构建 | 第21-23页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第21-22页 |
| 2.2.2 HA基因表达盒的PCR扩增 | 第22页 |
| 2.2.3 表达盒PCR产物连接、转化与阳性克隆的鉴定 | 第22页 |
| 2.2.4 转移载体pHVT-H9HA的构建 | 第22-23页 |
| 2.3 转移载体pHVT-H9HA的鉴定表达 | 第23-24页 |
| 2.3.1 酶切鉴定 | 第23-24页 |
| 2.3.2 Western-blot试验 | 第24页 |
| 2.3.3 间接免疫荧光试验(IFA) | 第24页 |
| 2.4 重组病毒的构建及纯化 | 第24-26页 |
| 2.4.1 rHVT-EGFP基因组DNA的制备 | 第24-25页 |
| 2.4.2 转移载体pHVT-H9HA的线性化 | 第25页 |
| 2.4.3 线性化的转移载体与rHVT-EGFP DNA共转染CEF | 第25-26页 |
| 2.4.4 重组病毒rHVT-H9HA的纯化 | 第26页 |
| 2.5 重组病毒的鉴定 | 第26-29页 |
| 2.5.1 PCR鉴定 | 第26页 |
| 2.5.2 Western-Blot试验鉴定 | 第26页 |
| 2.5.3 间接免疫荧光试验(IFA)鉴定 | 第26-27页 |
| 2.5.4 Southern blot | 第27-29页 |
| 2.5.5 重组病毒在CEF生长特性的检测 | 第29页 |
| 2.6 重组病毒rHVT-H9HA的免疫效力试验 | 第29-30页 |
| 2.6.1. 重组病毒的增殖与滴度测定 | 第29页 |
| 2.6.2 重组病毒免疫保护试验 | 第29-30页 |
| 2.6.3 排毒检测 | 第30页 |
| 2.6.4 统计学分析 | 第30页 |
| 3 结果 | 第30-42页 |
| 3.1 真核表达载体的构建 | 第30-32页 |
| 3.1.1 HA基因的克隆 | 第30-31页 |
| 3.1.2 HA基因的遗传进化分析 | 第31页 |
| 3.1.3 HA基因表达盒的扩增 | 第31-32页 |
| 3.2 真核表达载体的鉴定 | 第32-34页 |
| 3.2.1 酶切鉴定 | 第32页 |
| 2.3.2 Western blot鉴定 | 第32-33页 |
| 2.3.3 IFA鉴定 | 第33-34页 |
| 3.3 重组病毒rHVT-H9HA的构建 | 第34页 |
| 3.4 重组病毒的鉴定 | 第34-38页 |
| 3.4.1 PCR鉴定 | 第34-35页 |
| 3.4.2 Western blot鉴定 | 第35-36页 |
| 3.4.3 IFA鉴定 | 第36-37页 |
| 3.4.4 Southern blot鉴定 | 第37页 |
| 3.4.5 重组病毒在CEF上的生长曲线 | 第37-38页 |
| 3.5 重组病毒的免疫效力评价 | 第38-39页 |
| 3.5.1 HI抗体消长规律 | 第38-39页 |
| 3.5.2 攻毒后排毒率 | 第39页 |
| 4. 讨论 | 第39-42页 |
| 全文总结 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-47页 |
| 附录 | 第47-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
