| 摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 符号说明 | 第9-11页 |
| 第一章 新城疫流行特点及其疫苗研究进展 | 第11-16页 |
| 1 新城疫流行现状简介 | 第11-13页 |
| 2 新城疫疫苗研究进展 | 第13-16页 |
| 第二章 表达基因Ⅶ型新城疫病毒HN糖蛋白的重组火鸡疱疹病毒构建及其免疫效力试验 | 第16-44页 |
| 1 材料 | 第16-18页 |
| 1.1 病毒、SPF鸡、鸡胚及细胞 | 第16页 |
| 1.2 质粒和菌株 | 第16-17页 |
| 1.3 主要试剂 | 第17页 |
| 1.3.1 主要化学试剂 | 第17页 |
| 1.3.2 分子生物学试剂 | 第17页 |
| 1.4 分子生物学软件 | 第17页 |
| 1.5 主要仪器 | 第17-18页 |
| 2 方法 | 第18-30页 |
| 2.1 重组病毒rHVT-EGFP的纯化扩大 | 第18-19页 |
| 2.1.1 rHVT-EGFP基因组的获取 | 第18页 |
| 2.1.2 rHVT-EGFP重组病毒的拯救 | 第18-19页 |
| 2.1.3 重组病毒rHVT-EGFP的纯化和扩增 | 第19页 |
| 2.2 重组质粒pHVT-US2-HN的构建 | 第19-23页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第19-20页 |
| 2.2.2 病毒RNA的提取 | 第20页 |
| 2.2.3 RT-PCR | 第20-21页 |
| 2.2.4 PCR产物的连接与阳性克隆的鉴定 | 第21-22页 |
| 2.2.5 克隆载体pT3-HN的获取 | 第22-23页 |
| 2.3 转移载体pHVT-US2-HN的构建 | 第23-24页 |
| 2.4 转移载体pHVT-US2-HN的鉴定 | 第24-25页 |
| 2.4.1 酶切鉴定 | 第24-25页 |
| 2.4.2 Western-Blot试验鉴定 | 第25页 |
| 2.4.3 间接免疫荧光试验(IFA)鉴定 | 第25页 |
| 2.5 表达新城疫基因Ⅶ型HN基因的重组HVT的构建 | 第25-26页 |
| 2.6 重组病毒rHVT-US2-HN的鉴定 | 第26-29页 |
| 2.6.1 PCR鉴定重组病毒 | 第26页 |
| 2.6.2 间接免疫荧光试验(IFA)鉴定重组病毒 | 第26页 |
| 2.6.3 Western-Blot试验鉴定重组病毒 | 第26页 |
| 2.6.4 Southern-Blot试验鉴定重组病毒 | 第26-29页 |
| 2.6.4.1 引物设计与合成 | 第26-27页 |
| 2.6.4.2 基因组DNA的准备 | 第27-28页 |
| 2.6.4.3 转膜 | 第28页 |
| 2.6.4.4 探针标记及杂交 | 第28页 |
| 2.6.4.5 免疫检测 | 第28-29页 |
| 2.6.5 重组病毒在CEF上的生长特性 | 第29页 |
| 2.6.6 重组病毒rHVT-US2-HN的空斑计数试验 | 第29页 |
| 2.7 重组病毒针对NDV的免疫保护评价 | 第29-30页 |
| 2.7.1 rHVT-US2-HN对NDV的免疫保护试验 | 第29-30页 |
| 2.7.2 剖检病变的观测 | 第30页 |
| 2.7.3 抗体检测 | 第30页 |
| 2.7.4 排毒试验 | 第30页 |
| 2.7.5 不同疫苗组在强毒株攻毒后的免疫保护效力 | 第30页 |
| 3 结果 | 第30-41页 |
| 3.1 重组病毒rHVT-US2-EGFP的纯化 | 第30-31页 |
| 3.2 真核表达载体pHVT-US2-HN的构建 | 第31-33页 |
| 3.2.1 NDV HN基因的克隆鉴定 | 第31页 |
| 3.2.2 HN基因表达盒的克隆鉴定 | 第31-32页 |
| 3.2.3 转移载体质粒pHVT-US2-HN酶切鉴定 | 第32-33页 |
| 3.2.4 转移载体pHVT-US2-HN Western -Blot试验鉴定 | 第33页 |
| 3.3 重组病毒rHVT-US2-HN的构建及鉴定 | 第33-38页 |
| 3.3.1 重组病毒rHVT-US2-HN的构建 | 第33-34页 |
| 3.3.2 重组病毒rHVT-US2-HN PCR鉴定 | 第34-35页 |
| 3.3.3 重组病毒rHVT-US2-HN间接免疫荧光试验(IFA)鉴定 | 第35-36页 |
| 3.3.4 重组病毒rHVT-US2-HN Western-Blot鉴定 | 第36页 |
| 3.3.5 重组病毒rHVT-US2-HN Southern-Blot鉴定 | 第36-37页 |
| 3.3.6 重组病毒生长特性结果 | 第37-38页 |
| 3.4 重组病毒免疫效力评价 | 第38-41页 |
| 3.4.1 空斑计数试验 | 第38页 |
| 3.4.2 动物实验剖检病变 | 第38页 |
| 3.4.3 HI抗体消长规律 | 第38-39页 |
| 3.4.4 发病率和死亡率 | 第39-40页 |
| 3.4.5 攻毒后排毒率 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-44页 |
| 全文总结 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
