| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略词表(Abbreviation) | 第12-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-20页 |
| 1.1 猪博卡病毒研究进展 | 第13-15页 |
| 1.1.1 猪博卡病毒病原学 | 第13-14页 |
| 1.1.2 猪博卡病毒的流行病学研究进展 | 第14页 |
| 1.1.3 猪博卡病毒检测技术概况 | 第14-15页 |
| 1.1.4 猪博卡病毒致病性研究 | 第15页 |
| 1.2 猪圆环病毒2型研究进展 | 第15-16页 |
| 1.2.1 PCV2流行病学进展 | 第15-16页 |
| 1.2.2 猪圆环病毒2型致病性 | 第16页 |
| 1.3 猪博卡病毒与其他病毒混合感染概况 | 第16-17页 |
| 1.4 猪博卡病毒与机体炎症关系 | 第17-18页 |
| 1.4.1 炎性细胞因子概述 | 第17页 |
| 1.4.2 炎症风暴 | 第17页 |
| 1.4.3 病毒诱导的炎症反应 | 第17-18页 |
| 1.5 病毒感染与紧密连接研究进展 | 第18-19页 |
| 1.5.1 紧密连接概述 | 第18页 |
| 1.5.2 紧密连接蛋白与炎性因子的关系 | 第18-19页 |
| 1.6 研究目的和意义 | 第19-20页 |
| 第2章 猪博卡病毒VP1蛋白主要抗原表位区的原核表达及间接ELISA方法的建立 | 第20-35页 |
| 2.1 试验材料 | 第20-23页 |
| 2.1.1 毒株和血清 | 第20页 |
| 2.1.2 载体和菌株 | 第20页 |
| 2.1.3 主要试剂及试剂盒 | 第20-21页 |
| 2.1.4 主要实验仪器 | 第21页 |
| 2.1.5 其他试剂的配制 | 第21-23页 |
| 2.2 试验方法 | 第23-25页 |
| 2.2.1 细胞抗原表位的预测 | 第23页 |
| 2.2.2 引物设计 | 第23页 |
| 2.2.3 病毒DNA提取及PCR扩增 | 第23页 |
| 2.2.4 原核表达质粒的构建及鉴定 | 第23-24页 |
| 2.2.5 重组蛋白的诱导表达、纯化 | 第24页 |
| 2.2.6 Western blot | 第24页 |
| 2.2.7 间接ELISA方法 | 第24页 |
| 2.2.8 阳性血清筛选及鉴定 | 第24页 |
| 2.2.9 抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释度的确定 | 第24-25页 |
| 2.2.10 间接ELISA阴阳性临界值的确定 | 第25页 |
| 2.2.11 间接ELISA检测方法的评价 | 第25页 |
| 2.2.12 临床血清样品检测 | 第25页 |
| 2.3 结果与分析 | 第25-33页 |
| 2.3.1 VP1基因抗原表位的预测 | 第25-26页 |
| 2.3.2 VP1基因克隆及重组质粒的鉴定 | 第26-27页 |
| 2.3.3 重组蛋白的诱导表达、纯化和Western blot分析 | 第27-28页 |
| 2.3.4 阳性血清的确定 | 第28-29页 |
| 2.3.5 重组蛋白VP1最佳包被浓度和血清最佳稀释度的确定 | 第29-30页 |
| 2.3.6 ELISA阴阳性临界值的确定 | 第30页 |
| 2.3.7 间接ELISA检测方法的评价 | 第30-32页 |
| 2.3.8 临床血清样本的检测 | 第32-33页 |
| 2.4 讨论 | 第33-35页 |
| 第3章 PBoV与PCV2共感染对细胞影响的研究 | 第35-53页 |
| 3.1 试验材料 | 第35页 |
| 3.2 试验方法 | 第35-41页 |
| 3.2.1 病毒感染 | 第35-36页 |
| 3.2.2 细胞凋亡试验 | 第36页 |
| 3.2.3 PBoV间接免疫荧光试验 | 第36页 |
| 3.2.4 PBoV增殖检测 | 第36-37页 |
| 3.2.5 RT-qPCR方法测定mRNA相对表达量 | 第37-39页 |
| 3.2.6 IPEC-J2细胞HE染色 | 第39-40页 |
| 3.2.7 IPEC-J2细胞跨膜电阻试验 | 第40页 |
| 3.2.8 细胞因子含量检测 | 第40页 |
| 3.2.9 Western blot检测紧密连接蛋白表达情况 | 第40-41页 |
| 3.3 实验数据处理和分析 | 第41页 |
| 3.4 实验结果与分析 | 第41-50页 |
| 3.4.1 病毒PCR检测 | 第41页 |
| 3.4.2 感染PBoV、PCV2后PK-15细胞形态变化 | 第41-42页 |
| 3.4.3 PBoV在感染细胞内阳性率情况 | 第42-43页 |
| 3.4.4 PBoV在PK-15细胞内增殖结果 | 第43-44页 |
| 3.4.5 感染PBoV、PCV2后IPEC-J2细胞形态变化 | 第44-45页 |
| 3.4.6 流式细胞仪检测IPEC-J2感染病毒后凋亡情况 | 第45-46页 |
| 3.4.7 PBoV在IPEC-J2细胞内增殖情况 | 第46页 |
| 3.4.8 IPEC-J2感染病毒后炎性因子表达变化 | 第46-48页 |
| 3.4.9 病毒对IPEC-J2屏障功能的影响 | 第48-49页 |
| 3.4.10 病毒对IPEC-J2紧密连接蛋白表达的影响 | 第49-50页 |
| 3.5 讨论 | 第50-53页 |
| 3.5.1 PBoV和PCV2感染引起细胞病变及其增殖状况 | 第50-51页 |
| 3.5.2 PBoV和PCV2混合感染与细胞凋亡 | 第51页 |
| 3.5.3 病毒感染后炎性因子高表达 | 第51页 |
| 3.5.4 病毒感染对IPEC-J2细胞屏障影响 | 第51-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 在读期间发表文章 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
