| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 引言 | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-25页 |
| 1.1 微生物的耐热机制 | 第14-19页 |
| 1.1.1 细胞表层结构细胞膜 | 第14-15页 |
| 1.1.2 DNA 及 RNA 稳定性 | 第15页 |
| 1.1.3 转录因子的调节 | 第15-16页 |
| 1.1.4 嗜热蛋白质及嗜热酶的稳定性 | 第16-17页 |
| 1.1.5 热休克蛋白及泛素的调节机制 | 第17-19页 |
| 1.1.6 微生物芽孢的耐热机制 | 第19页 |
| 1.2 耐热微生物在工程中的应用 | 第19-20页 |
| 1.2.1 食品发酵及酶工程 | 第19-20页 |
| 1.2.2 环境保护 | 第20页 |
| 1.2.3 金属回收和石油采集 | 第20页 |
| 1.2.4 在医药领域 | 第20页 |
| 1.3 微生物耐热机制应用于在合成生物系统 | 第20-22页 |
| 1.3.1 改善大肠杆菌等合成生物系统的耐受性 | 第21页 |
| 1.3.2 合成生物系统其他功能的改造 | 第21-22页 |
| 1.4 合成生物技术及应用 | 第22-23页 |
| 1.4.1 标准化元件的挖掘 | 第22页 |
| 1.4.2 对底盘宿主的改造 | 第22页 |
| 1.4.3 多种 DNA 拼接技术 | 第22-23页 |
| 1.5 论文研究意义 | 第23-24页 |
| 1.6 技术框架 | 第24-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-38页 |
| 2.1 材料 | 第25-28页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第25页 |
| 2.1.2 培养基 | 第25页 |
| 2.1.3 药品和试剂 | 第25-27页 |
| 2.1.4 仪器 | 第27-28页 |
| 2.2 方法 | 第28-38页 |
| 2.2.1 菌株培养 | 第28页 |
| 2.2.2 大肠杆菌感受态的制备及热击转化 | 第28-29页 |
| 2.2.3 耐热元器件诱导型表达质粒的构建 | 第29-32页 |
| 2.2.4 SDS-PAGE 凝胶电泳分析 | 第32-33页 |
| 2.2.5 耐热大肠杆菌的构建 | 第33-35页 |
| 2.2.6 大肠杆菌热处理存活率的测定 | 第35-36页 |
| 2.2.7 大肠杆菌梯度升温培养 | 第36页 |
| 2.2.8 大肠杆菌恒定高温培养 | 第36页 |
| 2.2.9 大肠杆菌的点滴平板实验 | 第36页 |
| 2.2.10 大肠杆菌的有机溶剂耐受性实验 | 第36-37页 |
| 2.2.11 耐热元器件与木糖醇途径的集成 | 第37页 |
| 2.2.12 木糖醇的检测 | 第37-38页 |
| 第三章 微生物耐热元件的挖掘与元器件功能表征 | 第38-52页 |
| 引言 | 第38页 |
| 3.1 耐热元件的挖掘 | 第38-39页 |
| 3.2 耐热元器件的设计与构建 | 第39-43页 |
| 3.2.1 HSP 耐热元器件及表达质粒的构建与转化 | 第39-40页 |
| 3.2.2 类泛素耐热元器件及表达质粒的构建与转化 | 第40页 |
| 3.2.3 转录因子耐热元器件及表达质粒的构建与转化 | 第40-42页 |
| 3.2.4 多功能耐热元器件及表达质粒的设计与构建 | 第42-43页 |
| 3.3 耐热元器件功能的初步表征 | 第43-49页 |
| 3.3.1 groel/groes 耐热元器件的功能表征 | 第43-45页 |
| 3.3.2 dnak/dnaj 耐热元器件的功能表征 | 第45-46页 |
| 3.3.3 热激蛋白 ibpa 耐热元器件的功能表征 | 第46-47页 |
| 3.3.4 转录因子耐热元器件的功能表征 | 第47-48页 |
| 3.3.5 类泛素蛋白耐热元器件的功能表征 | 第48-49页 |
| 3.4 耐热元器件提高大肠杆菌耐热性的原因分析 | 第49-50页 |
| 3.5 小结 | 第50-52页 |
| 第四章 耐热大肠杆菌的构建与抗逆性能评价 | 第52-67页 |
| 引言 | 第52页 |
| 4.1 耐热大肠杆菌的的设计与构建 | 第52-55页 |
| 4.1.1 功能基因与组成型启动子的克隆 | 第53-54页 |
| 4.1.2 耐热元器件表达质粒的构建与转化 | 第54-55页 |
| 4.2 耐热大肠杆菌的性能评价 | 第55-62页 |
| 4.2.1 过表达 GroEL/GroES 的耐热工程菌的性能评价 | 第55-57页 |
| 4.2.2 过表达 DnaK/DnaJ 的耐热工程菌的性能评价 | 第57-58页 |
| 4.2.3 过表达 IbpA 的耐热工程菌的性能评价 | 第58-59页 |
| 4.2.4 过表达转录因子的耐热工程菌的性能评价 | 第59-61页 |
| 4.2.5 过表达 ThiF/TTE0977 的耐热工程菌的性能评价 | 第61-62页 |
| 4.3 耐热大肠杆菌的有机溶剂抗逆性分析 | 第62-65页 |
| 4.3.1 丁醇耐受性分析 | 第62-63页 |
| 4.3.2 1,3-丙二醇耐受性分析 | 第63-64页 |
| 4.3.3 乙酸耐受性分析 | 第64-65页 |
| 4.3.4 乙醇耐受性分析 | 第65页 |
| 4.4 小结 | 第65-67页 |
| 第五章 耐热大肠杆菌应用于木糖醇的转化 | 第67-73页 |
| 引言 | 第67页 |
| 5.1 耐热元器件与木糖醇途径的集成 | 第67-69页 |
| 5.1.1 木糖还原酶 pET-21b-gapA-xr 表达载体的构建 | 第67-69页 |
| 5.1.2 耐热元器件与木糖醇途径的集成 | 第69页 |
| 5.2 耐热元器件对木糖醇生产的影响 | 第69-72页 |
| 5.2.1 工程菌 40℃发酵生产木糖醇 | 第69-71页 |
| 5.2.2 工程菌 42-43℃发酵生产木糖醇 | 第71-72页 |
| 5.3 小结 | 第72-73页 |
| 第六章 结论与展望 | 第73-75页 |
| 6.1 结论 | 第73页 |
| 6.2 展望 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 作者简介 | 第82-83页 |
| 导师评阅表 | 第83页 |
