| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第11-18页 |
| 1.1 植物抗寒的分子生物学研究进展 | 第11-12页 |
| 1.2 转录因子与植物抗寒性 | 第12-15页 |
| 1.3 MfIAA15蛋白和MfZFP蛋白 | 第15-16页 |
| 1.4 黄花苜蓿与截型苜蓿抗寒性差异 | 第16-17页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-32页 |
| 2.1 材料培养与处理 | 第18-19页 |
| 2.1.1 材料的培养 | 第18页 |
| 2.1.1.1 苜蓿的培养 | 第18页 |
| 2.1.1.2 拟南芥的培养 | 第18页 |
| 2.1.1.3 菌株的培养 | 第18页 |
| 2.1.2 材料的处理 | 第18-19页 |
| 2.1.2.1 低温处理 | 第18-19页 |
| 2.1.2.2 Basta处理 | 第19页 |
| 2.2 仪器与试剂 | 第19-22页 |
| 2.2.1 主要仪器 | 第19-20页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第20页 |
| 2.2.3 常用培养基与试剂 | 第20-21页 |
| 2.2.4 主要引物 | 第21页 |
| 2.2.5 主要载体 | 第21-22页 |
| 2.3 实验方法 | 第22-32页 |
| 2.3.1 目的基因的克隆 | 第22-26页 |
| 2.3.1.1 苜蓿的冷处理与取样 | 第22页 |
| 2.3.1.2 苜蓿叶片总RNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.3.1.3 cDNA的合成 | 第23页 |
| 2.3.1.4 荧光定量PCR | 第23-24页 |
| 2.3.1.5 基因的筛选 | 第24页 |
| 2.3.1.6 设计特异引物 | 第24页 |
| 2.3.1.7 目的基因ORF的克隆 | 第24页 |
| 2.3.1.8 目的片段的回收与T载体的连接 | 第24-25页 |
| 2.3.1.9 热激转化大肠杆菌 | 第25页 |
| 2.3.1.10 重组子的鉴定与保存 | 第25-26页 |
| 2.3.2 MfIAA15,Mf ZFP基因过表达载体的构建 | 第26-28页 |
| 2.3.2.1 MfIAA15,Mf ZFP的ORF片段的酶切位点的加入 | 第26页 |
| 2.3.2.2 回收目的片段和载体 | 第26-27页 |
| 2.3.2.3 连接载体与目的片段 | 第27页 |
| 2.3.2.4 热激转化大肠杆菌 | 第27页 |
| 2.3.2.5 大肠杆菌重组子的检测与保存 | 第27页 |
| 2.3.2.6 电击转化农杆菌EHA105 | 第27-28页 |
| 2.3.2.7 农杆菌重组子的检测与保存 | 第28页 |
| 2.3.3 农杆菌介导MfIAA15,MfZFP过表达载体转化截型苜蓿R108 | 第28-29页 |
| 2.3.3.1 农杆菌侵染液的制备 | 第28页 |
| 2.3.3.2 农杆菌侵染液侵染截型苜蓿R108外植体 | 第28页 |
| 2.3.3.3 共培养 | 第28-29页 |
| 2.3.3.4 愈伤组织的诱导 | 第29页 |
| 2.3.3.5 愈伤组织的再分化 | 第29页 |
| 2.3.3.6 分化苗的诱导生根 | 第29页 |
| 2.3.3.7 组培苗的土培 | 第29页 |
| 2.3.4 转基因截型苜蓿的分子鉴定 | 第29-30页 |
| 2.3.4.1 微量法提取植物DNA（小抽） | 第29-30页 |
| 2.3.4.2 PCR检测 | 第30页 |
| 2.3.5 农杆菌介导过表达MfIAA15载体转化拟南芥 | 第30-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-52页 |
| 3.1 MfIAA15,Mf ZFP，MtIAA15,MtZFP的动态表达分析 | 第32页 |
| 3.2 MfIAA15的克隆分析及其过表达转基因植株的获得 | 第32-43页 |
| 3.2.1 MfIAA15的克隆 | 第32-33页 |
| 3.2.2 MfIAA15的序列分析 | 第33-34页 |
| 3.2.3 MfIAA15蛋白理化性质预测 | 第34页 |
| 3.2.4 MfIAA15蛋白的信号肽与亚细胞定位预测 | 第34-35页 |
| 3.2.5 MfIAA15蛋白的多重序列对比与同源性分析 | 第35-38页 |
| 3.2.6 MfIAA15过量表达载体构建 | 第38-40页 |
| 3.2.7 农杆菌介导的过表达载体转化截型苜蓿 | 第40-42页 |
| 3.2.8 农杆菌介导的MfIAA15过表达载体转化Col0型野生型拟南芥 | 第42-43页 |
| 3.3 MfZFP的克隆分析及其过表达转基因植株的获得 | 第43-52页 |
| 3.3.1 MfZFP的克隆 | 第43页 |
| 3.3.2 MfZFP的序列分析 | 第43-44页 |
| 3.3.3 MfZFP蛋白理化性质预测 | 第44-45页 |
| 3.3.4 MfZFP蛋白的信号肽与亚细胞定位预测 | 第45页 |
| 3.3.5 MfZFP蛋白的多重序列对比与同源性分析 | 第45-48页 |
| 3.3.6 MfZFP过量表达载体构建 | 第48-50页 |
| 3.3.7 农杆菌介导的过表达载体转化截型苜蓿 | 第50-52页 |
| 4 讨论与结论 | 第52-56页 |
| 4.1 MfIAA15、MfZFP蛋白的结构分析 | 第52页 |
| 4.2 MfIAA15、Mf ZFP过表达载体的转基因植株获得 | 第52-53页 |
| 4.3 MfIAA15、MfZFP与植物抗逆性之间的关系 | 第53-55页 |
| 4.4 结论 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 附录 | 第63-64页 |
