| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 英文缩略表 | 第16-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-35页 |
| 1.1 猪繁殖与呼吸综合征病毒概述 | 第17页 |
| 1.2 PRRSV病原学研究进展 | 第17-22页 |
| 1.2.1 PRRSV基因组结构 | 第17-18页 |
| 1.2.2 PRRSV基因组复制与亚基因组转录 | 第18-19页 |
| 1.2.3 PRRSV非结构蛋白与结构蛋白 | 第19-21页 |
| 1.2.4 PRRSV细胞嗜性与入侵 | 第21-22页 |
| 1.3 PRRSV持续性感染与先天性免疫 | 第22-24页 |
| 1.4 Micro RNA研究概述 | 第24-28页 |
| 1.4.1 Micro RNA的发现与定义 | 第24页 |
| 1.4.2 Micro RNA的生物学发生 | 第24-25页 |
| 1.4.3 Micro RNA的作用特征 | 第25-28页 |
| 1.5 Micro RNA识别及靶基因预测 | 第28-29页 |
| 1.6 宿主mi RNA与病毒相互作用 | 第29-34页 |
| 1.6.1 病毒感染对mi RNA表达谱的影响 | 第30页 |
| 1.6.2 mi RNA对病毒复制的影响 | 第30-32页 |
| 1.6.3 利用mi RNA影响病毒嗜性 | 第32-33页 |
| 1.6.4 mi RNA与PRRSV | 第33-34页 |
| 1.7 本研究目的和意义 | 第34-35页 |
| 第二章 mi R-26a通过激活I型干扰素通路抑制PRRSV复制 | 第35-57页 |
| 2.1 材料与方法 | 第35-47页 |
| 2.1.1 细胞与病毒 | 第35-36页 |
| 2.1.2 mi RNA模拟体（mimics） | 第36-37页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第37页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第37页 |
| 2.1.5 mi RNA mimics转染和病毒多步生长曲线 | 第37-38页 |
| 2.1.6 间接免疫荧光试验（IFA） | 第38页 |
| 2.1.7 SDS-PAGE和Western Blotting | 第38页 |
| 2.1.8 RNA分离提取和实时定量PCR（q RT-PCR） | 第38-42页 |
| 2.1.9 荧光素酶报告质粒的构建及荧光素酶试验 | 第42-47页 |
| 2.1.10 统计学分析 | 第47页 |
| 2.2 结果 | 第47-55页 |
| 2.2.1 mi R-26a具有抗PRRSV作用 | 第47-49页 |
| 2.2.2 mi R-26a对不同基因型和不同毒力的PRRSV毒株均有抑制作用 | 第49-50页 |
| 2.2.3 mi R-26a对PRRSV的抑制作用与剂量相关 | 第50-51页 |
| 2.2.4 mi R-26家族在PAM细胞上抑制PRRSV复制 | 第51-52页 |
| 2.2.5 种子区序列对于mi R-26发挥抗PRRSV作用是必需的 | 第52-53页 |
| 2.2.6 PAM细胞感染PRRSV引起mi R-26a/b上调 | 第53页 |
| 2.2.7 mi R-26a不与PRRSV基因组直接结合 | 第53页 |
| 2.2.8 mi R-26a上调I型干扰素及干扰素刺激基因的表达 | 第53-55页 |
| 2.3 讨论 | 第55-57页 |
| 第三章 细胞mi R-130抗PRRSV感染的相关研究 | 第57-75页 |
| 3.1 材料与方法 | 第57-64页 |
| 3.1.1 细胞、病毒和质粒 | 第57页 |
| 3.1.2 试剂和仪器 | 第57-58页 |
| 3.1.3 mi RNA的合成 | 第58页 |
| 3.1.4 mi RNA转染和病毒多步生长曲线 | 第58页 |
| 3.1.5 间接免疫荧光试验（IFA） | 第58页 |
| 3.1.6 SDS-PAGE和Western Blotting | 第58-59页 |
| 3.1.7 RNA分离提取和实时定量PCR（q RT-PCR） | 第59页 |
| 3.1.8 Taqman探针一步法荧光定量RT-PCR | 第59-61页 |
| 3.1.9 mi R-130靶位点的验证 | 第61页 |
| 3.1.10 动物体内试验 | 第61-64页 |
| 3.2 结果 | 第64-73页 |
| 3.2.1 软件预测PRRSV 5’UTR含有mi R-130潜在结合位点 | 第64-65页 |
| 3.2.2 mi R-130家族均具有抗PRRSV作用 | 第65-66页 |
| 3.2.3 mi R-130b对PRRSV复制的抑制作用最强 | 第66页 |
| 3.2.4 mi R-130b抑制PRRSV N蛋白表达 | 第66-67页 |
| 3.2.5 mi R-130b抑制作用的强弱与剂量相关 | 第67-68页 |
| 3.2.6 mi R-130b对不同北美型PRRSV均有抑制作用 | 第68-69页 |
| 3.2.7 mi R-130b直接靶向北美型PRRSV 5’ UTR | 第69-70页 |
| 3.2.8 mi R-130b不激活IFN-α 和TNF-α | 第70-71页 |
| 3.2.9 mi R-130b抗PRRSV感染的体内试验 | 第71-73页 |
| 3.3 讨论 | 第73-75页 |
| 第四章 利用细胞内源mi RNA影响PRRSV复制的初步探索 | 第75-85页 |
| 4.1 材料与方法 | 第75-80页 |
| 4.1.1 细胞、质粒与细菌 | 第75页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第75页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第75页 |
| 4.1.4 病毒感染和总RNA提取 | 第75-76页 |
| 4.1.5 小RNA深度测序及数据分析 | 第76页 |
| 4.1.6 mi RNA选取与引物设计 | 第76-77页 |
| 4.1.7 突变病毒构建 | 第77-79页 |
| 4.1.8 突变病毒拯救 | 第79页 |
| 4.1.9 间接免疫荧光试验（IFA） | 第79页 |
| 4.1.10 病毒多步生长曲线 | 第79-80页 |
| 4.1.11 突变病毒传代及测序 | 第80页 |
| 4.2 结果 | 第80-84页 |
| 4.2.1 深度测序小RNA文库的特征 | 第80-81页 |
| 4.2.2 PRRSV感染前后mi RNA表达的差异 | 第81-82页 |
| 4.2.3 定位在病毒基因组的vs RNA分布 | 第82页 |
| 4.2.4 突变病毒N蛋白检测 | 第82页 |
| 4.2.5 突变病毒生长曲线 | 第82-83页 |
| 4.2.6 突变病毒遗传稳定性 | 第83-84页 |
| 4.3 讨论 | 第84-85页 |
| 第五章 全文结论 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 作者简介 | 第101页 |
