| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第11-19页 |
| 1.1 香草醛 | 第11-13页 |
| 1.1.1 香草醛的应用及危害 | 第11页 |
| 1.1.2 香草醛的微生物降解方式 | 第11-13页 |
| 1.2 香草醛脱氢酶的研究 | 第13-14页 |
| 1.3 谷氨酸棒杆菌及其介导的芳香化合物的代谢途径 | 第14-18页 |
| 1.4 本文研究的目的以及意义 | 第18-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-32页 |
| 2.1 材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 菌株、质粒 | 第19页 |
| 2.1.2 主要试剂及培养基 | 第19-20页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-32页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第20页 |
| 2.2.2 谷氨酸棒杆菌基因组DNA提取 | 第20-21页 |
| 2.2.3 质粒提取方法 | 第21页 |
| 2.2.4 PCR扩增 | 第21-22页 |
| 2.2.5 电泳分析 | 第22-23页 |
| 2.2.6 DNA片段的回收与纯化 | 第23-24页 |
| 2.2.7 目的片段及载体的酶切、连接与转化 | 第24-25页 |
| 2.2.8 感受态的制备以及转化方法 | 第25页 |
| 2.2.9 重组质粒鉴定 | 第25-26页 |
| 2.2.10 缺失突变体筛选 | 第26-27页 |
| 2.2.11 唯一碳源为芳香族化合物的生理功能研究 | 第27页 |
| 2.2.12 VDHATCC13032蛋白的外源诱导表达以及纯化 | 第27-28页 |
| 2.2.13 凝胶过滤层析分析 | 第28页 |
| 2.2.14 VDHATCC13032酶学性质的测定 | 第28-29页 |
| 2.2.15 VDHATCC13032参与芳香族化合物的生物转化过程 | 第29页 |
| 2.2.16 VDHATCC13032定点突变及酶学性质、动力学分析 | 第29-32页 |
| 第三章 结果 | 第32-46页 |
| 3.1 系统发育树分析 | 第32-33页 |
| 3.2 重组质粒的构建 | 第33-37页 |
| 3.2.1 自杀敲除载体重组质粒的构建 | 第33-35页 |
| 3.2.2 原核表达质粒pET28a-ncgl2578和互补表达质粒pXMJ19-ncgl2578的构建 | 第35-37页 |
| 3.3 VDHATCC13032的生理特性 | 第37-39页 |
| 3.3.1 ncgl2578基因缺失突变体的构建分析 | 第37-38页 |
| 3.3.2 生长曲线分析 | 第38-39页 |
| 3.4 VDHATCC13032蛋白生化性质 | 第39-46页 |
| 3.4.1 VDHATCC13032蛋白的外源诱导表达及纯化 | 第39-40页 |
| 3.4.2 VDHATCC13032蛋白酶学性质 | 第40-43页 |
| 3.4.3 VDHATCC13032蛋白参与芳香族化合物的生物转化过程 | 第43页 |
| 3.4.4 VDHATCC13032蛋白定点突变及酶学性质的比较 | 第43-46页 |
| 第四章 讨论与分析 | 第46-49页 |
| 第五章 总结 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 附录 1 | 第56-57页 |
| 附录 2 | 第57-58页 |
| 附录 3 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 作者简介 | 第60页 |
