| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 1 前言 | 第9-19页 |
| 1.1 辅酶Q_(10)介绍 | 第9页 |
| 1.2 辅酶Q_(10)的理化性质 | 第9页 |
| 1.3 辅酶Q_(10)的功能与应用 | 第9-10页 |
| 1.3.1 辅酶Q_(10)的功能 | 第9页 |
| 1.3.2 辅酶Q_(10)的应用 | 第9-10页 |
| 1.4 辅酶Q_(10)的合成方法 | 第10-11页 |
| 1.4.1 动植物提取法 | 第10页 |
| 1.4.2 化学合成法 | 第10-11页 |
| 1.4.3 微生物发酵法 | 第11页 |
| 1.5 辅酶Q_(10)的生产菌株与研究现状 | 第11-15页 |
| 1.5.1 类球红细菌 | 第11页 |
| 1.5.2 辅酶Q_(10)在类球红细菌中的合成 | 第11-13页 |
| 1.5.3 辅酶Q_(10)的研究现状 | 第13-15页 |
| 1.6 全局转录调控因子对类球红细菌胞内色素合成的影响 | 第15-16页 |
| 1.7 类球红细菌细胞呼吸链与辅酶Q_(10)合成的关系 | 第16-17页 |
| 1.8 本课题的研究思路 | 第17-19页 |
| 1.8.1 研究背景与意义 | 第17-18页 |
| 1.8.2 研究内容 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-23页 |
| 2.1.1 实验所用菌株和质粒 | 第19页 |
| 2.1.2 实验所用药品及试剂 | 第19-21页 |
| 2.1.3 实验所用仪器及设备 | 第21页 |
| 2.1.4 实验所用培养基及溶液 | 第21-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-37页 |
| 2.2.1 类球红细菌基因组DNA的提取 | 第23页 |
| 2.2.2 琼脂糖凝胶电泳 | 第23页 |
| 2.2.3 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第23-24页 |
| 2.2.4 载体pK18mobsacB介绍 | 第24页 |
| 2.2.5 敲除载体pK18mobsacB::prrA-L-R的构建 | 第24-29页 |
| 2.2.6 敲除载体pK18mobsacB::ppsR-L-R的构建 | 第29-30页 |
| 2.2.7 敲除载体pK18mobsacB::cyt aa_3-L-R的构建 | 第30-31页 |
| 2.2.8 敲除载体pK18mobsacB::ccoN-L-R的构建 | 第31-32页 |
| 2.2.9 敲除载体pK18mobsacB::puhA-L-R的构建 | 第32页 |
| 2.2.10 敲除载体pK18mobsacB::sdhB-L-R的构建 | 第32-33页 |
| 2.2.11 类球红细菌接合转移操作方法 | 第33-34页 |
| 2.2.12 类球红细菌基因敲除菌株的筛选与鉴定 | 第34-35页 |
| 2.2.13 类球红细菌代谢产物的分析测定 | 第35-37页 |
| 3 结果与讨论 | 第37-62页 |
| 3.1 细胞色素及呼吸链相关基因的生物学信息 | 第37-38页 |
| 3.2 类球红细菌基因组DNA的提取 | 第38页 |
| 3.3 类球红细菌接合转移方法的优化 | 第38-40页 |
| 3.4 细胞色素相关敲除载体的构建及敲除菌株的筛选 | 第40-45页 |
| 3.4.1 prrA基因敲除载体pLH320的构建 | 第40-41页 |
| 3.4.2 ppsR基因敲除载体pLH358的构建 | 第41-42页 |
| 3.4.3 prrA基因敲除菌株的筛选 | 第42-44页 |
| 3.4.4 ppsR基因敲除菌株的筛选 | 第44-45页 |
| 3.5 呼吸链相关敲除载体的构建及敲除菌株的筛选 | 第45-52页 |
| 3.5.1 cyt aa_3基因敲除载体pLH346的构建 | 第45-46页 |
| 3.5.2 ccoN基因敲除载体pLH355的构建 | 第46-47页 |
| 3.5.3 puhA基因敲除载体pLH356的构建 | 第47-48页 |
| 3.5.4 sdhB基因敲除载体pLH357的构建 | 第48页 |
| 3.5.5 cyt aa_3基因敲除菌株的筛选 | 第48-49页 |
| 3.5.6 ccoN基因敲除菌株的筛选 | 第49-50页 |
| 3.5.7 puhA基因敲除菌株的筛选 | 第50-51页 |
| 3.5.8 sdhB基因敲除菌株的筛选 | 第51-52页 |
| 3.6 细胞色素累积对类球红细菌合成辅酶Q_(10)的影响 | 第52-54页 |
| 3.6.1 prrA与ppsR敲除菌与野生型WT的表型对比分析 | 第52-53页 |
| 3.6.2 prrA与ppsR敲除菌与WT的生长及代谢差异分析 | 第53-54页 |
| 3.7 呼吸链活性对类球红细菌合成辅酶Q_(10)的影响 | 第54-59页 |
| 3.7.1 不同氧浓度对WT发酵的影响 | 第54-55页 |
| 3.7.2 基因敲除菌株与WT的胞内色素积累对比分析 | 第55-56页 |
| 3.7.3 基因敲除菌株与WT的生长对比分析 | 第56-57页 |
| 3.7.4 基因敲除菌株与WT的辅酶Q_(10)产量对比分析 | 第57-58页 |
| 3.7.5 氧浓度对呼吸链相关基因的影响 | 第58-59页 |
| 3.8 利用sdhB敲除菌两步发酵合成辅酶Q_(10) | 第59-62页 |
| 3.8.1 两步发酵模型的建立 | 第59-60页 |
| 3.8.2 发酵数据处理与分析 | 第60-62页 |
| 4 结论 | 第62-63页 |
| 5 展望 | 第63-64页 |
| 6 参考文献 | 第64-70页 |
| 7 攻读硕士学位期间论文发表情况 | 第70-71页 |
| 8 致谢 | 第71页 |
